HTRF AAV1 CAPSID KIT - 10K PTS

产品概述

腺相关病毒（AAV）载体是治疗多种人类疾病的领先基因递送平台，其中 AAV1 血清型在骨骼肌和中枢神经系统的基因递送中表现出高效性。HTRF AAV1 衣壳检测试剂盒专为 AAV1 病毒颗粒的检测与定量设计，采用免洗涤、操作简便的检测格式，相较于传统 ELISA 方法，通量显著提升，为 AAV1 相关基因治疗药物的研发、生物工艺生产质控及过程优化提供高效、精准的解决方案。该试剂盒基于 TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）技术平台，适用于生物工艺场景，可兼容从原始收获物到终产品的各类样品（包括细胞上清液、细胞裂解液），凭借稳定的分析性能与广泛的样品兼容性，助力基因治疗药物研发与生产流程的标准化。

工作原理

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心 TR-FRET 检测技术，核心试剂包含两种特异性抗 AAV1 抗体：一种是辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗 AAV1 抗体，可与预混液 1 中的抗 HRP-d2（受体荧光团）结合；另一种是生物素（Biotin）偶联的抗 AAV1 抗体，可与预混液 2 中的链霉亲和素 - 铕穴状化合物（Streptavidin Eu-cryptate，供体荧光团）结合。当样品中存在 AAV1 衣壳时，两种抗体将分别与衣壳上的不同抗原表位结合，形成 “供体 - 生物素抗体 - AAV1 衣壳 - HRP 抗体 - 受体” 的夹心复合物，使供体与受体荧光团近距离接触，激发 FRET 信号。信号强度与样品中 AAV1 衣壳的浓度呈正相关，通过校准曲线即可实现 AAV1 病毒颗粒的定量分析，且全程无需洗涤步骤。（标注：1assay-principle-aav1-64aav1peg-64aav1peh-64aav1pey.svg 对应 “AAV1 衣壳检测试剂盒 TR-FRET 检测原理示意图”）

检测流程

试剂盒推荐使用 384 孔小体积白色检测板，也可灵活适配至 1536 孔板（按比例调整各试剂体积），具体流程如下：

1. 向检测板中加入 5 µL 样品或标准品，再加入 5 µL 稀释液；
2. 分别加入 5 µL 预混液 1（HRP 抗 AAV1 抗体 + 抗 HRP-d2）和 5 µL 预混液 2（生物素抗 AAV1 抗体 + 链霉亲和素 - 铕穴状化合物），最终反应体积为 20 µL；
3. 室温下孵育过夜；
4. 使用 HTRF 兼容检测仪读取信号，完成定量分析。

（标注：2assay-protocol-aav1-64aav1peg-64aav1peh-64aav1pey.svg 对应 “AAV1 衣壳检测试剂盒检测流程示意图”）

检测详情

核心检测参数

• 样品体积：5 µL
• 最终反应体积：20 µL
• 检测周期：室温孵育过夜
• 检测下限（LOD，稀释液中）：2.76×10⁸ VP/mL（病毒颗粒 / 毫升）
• 动态范围：9.73×10⁸ – 2.50×10¹¹ VP/mL
• 样品兼容性：兼容从原始收获物到终产品的各类样品，包括细胞上清液、细胞裂解液（适配裂解缓冲液 LB#3）

（标注：3assay-specification-aav1-64aav1peg-64aav1peh-64aav1pey.svg 对应 “AAV1 衣壳检测试剂盒核心检测参数表”）

分析性能

精密度（Precision）

1. 批内精密度（n=24）

对 3 个不同浓度的样品各重复检测 24 次，变异系数（CV）表现优异：浓度为 2.00×10¹¹ VP/mL 的样品 CV 为 4%，5.00×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 5%，1.25×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 4%，平均 CV 仅为 4%，体现出良好的批内稳定性。

2. 批间精密度（n=4）

3 个样品由不同操作者在 3 次独立实验中完成检测，浓度为 2.00×10¹¹ VP/mL 的样品 CV 为 2%，5.00×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 4%，1.25×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 8%，平均 CV 为 4%，证明试剂盒在不同实验条件下仍能保持稳定的检测性能。

稀释线性（Dilutional Linearity）

对高浓度样品进行梯度稀释验证，原液回收率为 100%，2 倍稀释后回收率为 109%，4 倍稀释后回收率为 116%，8 倍稀释后回收率为 116%，16 倍稀释后回收率为 108%，平均回收率达 110%，线性表现优异，可满足不同浓度样品的稀释检测需求。

干扰因素（Interferences）

1. SF9 细胞裂解液蛋白干扰

SF9 细胞裂解液中的总蛋白浓度会对检测结果产生一定干扰：当总蛋白浓度为 0.5 mg/mL 时，回收率仅为 54%；浓度降至 0.375 mg/mL 时，回收率提升至 59%；0.25 mg/mL 时回收率为 70%；0.125 mg/mL 时回收率达 81%；当总蛋白浓度≤0.05 mg/mL 时，回收率可达 93%，接近理想水平。

2. HEK293 细胞裂解液蛋白干扰

HEK293 细胞裂解液的蛋白浓度同样影响检测回收率：总蛋白浓度为 1.5 mg/mL 时，回收率为 64%；浓度降至 0.75 mg/mL 和 0.5 mg/mL 时，回收率均提升至 96%；0.375 mg/mL 时回收率为 94%；0.25 mg/mL 时回收率达 103%，说明当总蛋白浓度≤0.25 mg/mL 时，干扰较小，检测结果可靠。

加标回收率（Antigen Spike and Recovery）

1. SF9 细胞裂解液（0.05 mg/mL 总蛋白）

在总蛋白浓度为 0.05 mg/mL 的 SF9 细胞裂解液中加入不同浓度的 AAV1 标准品，1.00×10¹¹ VP/mL 浓度的回收率为 93%，5.00×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 96%，1.00×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 101%，平均回收率达 97%，检测准确性良好。

2. HEK293 细胞裂解液（0.75 mg/mL 总蛋白）

在总蛋白浓度为 0.75 mg/mL 的 HEK293 细胞裂解液中加标检测，1.00×10¹¹ VP/mL 浓度的回收率为 96%，5.00×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 98%，5.00×10⁹ VP/mL 浓度的回收率为 93%，平均回收率为 96%，体现出试剂盒在该体系下的稳定检测性能。

交叉反应性（Cross Reactivities）

对 AAV 家族其他血清型的交叉反应性进行评估，通过在试剂盒稀释液中稀释不同 AAV 血清型衣壳，按标准流程（5 µL 衣壳样品 + 5 µL 稀释液 + 10 µL 检测试剂，室温孵育过夜后读取信号）检测，结果显示试剂盒对不同血清型的亲和力存在差异，但不检测 AAV8 和 AAV9，特异性优异，可避免其他血清型的干扰。（标注：4analytical-performance-aav1-64aav1peg-64aav1peh-64aav1pey-cross-reactivities.svg 对应 “AAV1 衣壳检测试剂盒交叉反应性验证图”）

检测验证

完整与空 AAV1 颗粒的检测验证

为验证试剂盒对完整与空 AAV1 衣壳的检测能力，对 AAV1-CMV-eGFP 完整颗粒（含基因组）和空衣壳（不含基因组）进行检测。先通过独立定量实验将不同浓度的 AAV1-CMV-eGFP（GC/mL）转换为 VP/mL，再将完整颗粒与空衣壳用试剂盒稀释液稀释后，按标准流程（5 µL 样品 + 5 µL 稀释液 + 10 µL 检测试剂，室温孵育过夜）检测。结果显示，试剂盒对完整 AAV1 颗粒和空 AAV1 衣壳的检测效果一致，可全面覆盖两种类型颗粒的定量需求。（标注：5assay-validation-aav1-64aav1peg-64aav1peh-64aav1pey-full-empty-recognition.svg 对应 “AAV1 完整与空衣壳检测验证图”）

产品规格

• 应用领域：生物工艺（Bioprocessing，用于 AAV1 病毒颗粒的检测与定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 裂解缓冲液兼容性：适配裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样品体积：5 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：病毒颗粒（Viral Particles）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 单位规格：10,000 次检测（10,000 assay points）