HTRF AAV2 CAPSID KIT - 500 PTS

产品概述

腺相关病毒（AAV）载体是治疗多种人类疾病的领先基因递送平台，其中 AAV2 血清型是最早被研究且广泛应用的载体之一，对神经元、肝细胞、骨骼肌及视网膜等特定细胞或组织具有天然靶向性。HTRF AAV2 衣壳检测试剂盒专为 AAV2 病毒颗粒的检测与定量设计，采用免洗涤、操作简便的检测格式，相较于传统 ELISA 方法，通量显著提升，为 AAV2 相关基因治疗药物的研发、生物工艺生产质控及过程优化提供高效、精准的解决方案。该试剂盒基于 TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）技术平台，适用于生物工艺场景，可兼容从原始收获物到终产品的各类样品（包括细胞上清液、细胞裂解液），凭借稳定的分析性能与广泛的样品兼容性，助力基因治疗药物研发与生产流程的标准化。

工作原理

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心 TR-FRET 检测技术，核心试剂包含两种特异性抗 AAV2 抗体：一种是辣根过氧化物酶（HRP）偶联的抗 AAV2 抗体，可与预混液 1 中的抗 HRP-d2（受体荧光团）结合；另一种是生物素（Biotin）偶联的抗 AAV2 抗体，可与预混液 2 中的链霉亲和素 - 铕穴状化合物（Streptavidin Eu-cryptate，供体荧光团）结合。当样品中存在 AAV2 衣壳时，两种抗体将分别与衣壳上的不同抗原表位结合，形成 “供体 - 生物素抗体 - AAV2 衣壳 - HRP 抗体 - 受体” 的夹心复合物，使供体与受体荧光团近距离接触，激发 FRET 信号。信号强度与样品中 AAV2 衣壳的浓度呈正相关，通过校准曲线即可实现 AAV2 病毒颗粒的定量分析，且全程无需洗涤步骤。（标注：1assay-principle-aav1-64aav1peg-64aav1peh-64aav1pey.svg 对应 “AAV2 衣壳检测试剂盒 TR-FRET 检测原理示意图”）

检测流程

试剂盒推荐使用 384 孔小体积白色检测板，也可灵活适配至 1536 孔板（按比例调整各试剂体积），具体流程如下：

1. 向检测板中加入 5 µL 样品或标准品，再加入 5 µL 稀释液；
2. 分别加入 5 µL 预混液 1（HRP 抗 AAV2 抗体 + 抗 HRP-d2）和 5 µL 预混液 2（生物素抗 AAV2 抗体 + 链霉亲和素 - 铕穴状化合物），最终反应体积为 20 µL；
3. 室温下孵育过夜；
4. 使用 HTRF 兼容检测仪读取信号，完成定量分析。

（标注：2assay-protocol-aav1-64aav1peg-64aav1peh-64aav1pey.svg 对应 “AAV2 衣壳检测试剂盒检测流程示意图”）

检测详情

核心检测参数

• 样品体积：5 µL
• 最终反应体积：20 µL
• 检测周期：室温孵育过夜
• 检测下限（LOD，稀释液中）：1.11×10⁹ VP/mL（病毒颗粒 / 毫升）
• 动态范围：4.35×10⁹ – 6.00×10¹¹ VP/mL
• 样品兼容性：兼容从原始收获物到终产品的各类样品，包括细胞上清液、细胞裂解液（适配裂解缓冲液 LB#3）

（标注：1assay-specification-aav2-64aav2peg-64aav2peh-64aav2pey.svg 对应 “AAV2 衣壳检测试剂盒核心检测参数表”）

分析性能

精密度（Precision）

1. 批内精密度

对 3 个不同浓度的样品各重复检测 24 次，变异系数（CV）表现优异：浓度为 4.00×10¹¹ VP/mL 的样品 CV 为 3%，1.00×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 2%，2.50×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 2%，平均 CV 仅为 2%，体现出极佳的批内稳定性。

2. 批间精密度

3 个样品由不同操作者在 3 次独立实验中完成检测，浓度为 4.00×10¹¹ VP/mL 的样品 CV 为 1%，1.00×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 8%，2.50×10¹⁰ VP/mL 的样品 CV 为 1%，平均 CV 为 3%，证明试剂盒在不同实验条件下仍能保持稳定的检测性能。

稀释线性（Dilutional Linearity）

对高浓度样品进行梯度稀释验证，原液回收率为 100%，2 倍稀释后回收率为 103%，4 倍稀释后回收率为 106%，8 倍稀释后回收率为 104%，16 倍稀释后回收率为 87%，平均回收率达 103%，线性表现良好，可满足多数浓度样品的稀释检测需求。

干扰因素（Interferences）

1. SF9 细胞裂解液蛋白干扰

SF9 细胞裂解液中的总蛋白浓度会对检测结果产生一定干扰：当总蛋白浓度为 0.188 mg/mL 时，回收率为 54%；浓度降至 0.094 mg/mL 时，回收率提升至 72%；0.047 mg/mL 时回收率为 86%；0.023 mg/mL 时回收率为 84%，整体随蛋白浓度降低，干扰逐渐减小。

2. HEK293 细胞裂解液蛋白干扰

HEK293 细胞裂解液的蛋白浓度同样影响检测回收率：总蛋白浓度为 1.500 mg/mL 时，回收率为 72%；0.750 mg/mL 时回收率为 67%；0.375 mg/mL 时回收率为 85%；0.188 mg/mL 时回收率为 89%；0.094 mg/mL 时回收率达 90%，当总蛋白浓度≤0.094 mg/mL 时，检测结果更稳定可靠。

加标回收率（Antigen Spike and Recovery）

1. SF9 细胞裂解液（0.05 mg/mL 总蛋白）

在总蛋白浓度为 0.05 mg/mL 的 SF9 细胞裂解液中加入不同浓度的 AAV2 标准品，8.77×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 86%，3.56×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 103%，1.04×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 85%，平均回收率达 91%，检测准确性良好。

2. HEK293 细胞裂解液（0.4 mg/mL 总蛋白）

在总蛋白浓度为 0.4 mg/mL 的 HEK293 细胞裂解液中加标检测，1.00×10¹¹ VP/mL 浓度的回收率为 87%，2.50×10¹⁰ VP/mL 浓度的回收率为 83%，1.25×10⁹ VP/mL 浓度的回收率为 87%，平均回收率为 86%，满足常规检测的准确性要求。

交叉反应性（Cross Reactivities）

对 AAV 家族其他血清型的交叉反应性进行评估，通过在试剂盒稀释液中稀释不同 AAV 血清型衣壳，按标准流程（5 µL 衣壳样品 + 5 µL 稀释液 + 10 µL 检测试剂，室温孵育过夜后读取信号）检测，结果显示试剂盒对不同血清型的亲和力存在差异，但不检测 AAV8 和 AAV9，特异性优异，可避免其他血清型的干扰。（标注：2analytical-performance-aav2-64aav2peg-64aav2peh-64aav2pey-cross-reactivities.svg 对应 “AAV2 衣壳检测试剂盒交叉反应性验证图”）

检测验证

完整与空 AAV2 颗粒的检测验证

为验证试剂盒对完整与空 AAV2 衣壳的检测能力，对 AAV2-CMV-eGFP 完整颗粒（含基因组）和空衣壳（不含基因组）进行检测。先通过独立定量实验将不同浓度的 AAV2-CMV-eGFP（GC/mL）转换为 VP/mL，再将完整颗粒与空衣壳用试剂盒稀释液稀释后，按标准流程（5 µL 样品 + 5 µL 稀释液 + 10 µL 检测试剂，室温孵育过夜）检测。结果显示，试剂盒对完整 AAV2 颗粒和空 AAV2 衣壳的检测效果一致，可全面覆盖两种类型颗粒的定量需求。（标注：3assay-validation-aav2-64aav2peg-64aav2peh-64aav2pey-full-empty-recognition.svg 对应 “AAV2 完整与空衣壳检测验证图”）

产品规格

• 应用领域：生物工艺（Bioprocessing，用于 AAV2 病毒颗粒的检测与定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 裂解缓冲液兼容性：适配裂解缓冲液 1、裂解缓冲液 2、裂解缓冲液 3、裂解缓冲液 4
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样品体积：5 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：病毒颗粒（Viral Particles）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 单位规格：500 次检测（500 assay points）