产品概述
结缔组织生长因子(CTGF,又称 CCN2)是一种基质细胞信号调节剂,可调控细胞黏附、聚集、迁移等多种细胞功能,在血管内皮细胞、成纤维细胞、上皮细胞、平滑肌细胞等多种细胞类型中参与组织重塑平衡的调节。CTGF 的表达主要在转录水平受调控,机械应力及转化生长因子 β(TGFβ)等多种细胞因子和生长因子可诱导其表达。该 HTRF 人 CTGF 试剂盒为均相 “添加 - 读数”(Add & Read)检测工具,用于定量细胞上清液中 CTGF 的分泌水平。
工作原理
检测原理
CTGF 检测采用夹心免疫分析技术,涉及两种特异性抗 CTGF 抗体,分别标记 HTRF 供体染料和受体染料。检测信号强度与样本中 CTGF 的浓度直接成正比。(标注:human-CTGF-kit 为图表标识,对应 “人 CTGF 检测原理”)
检测流程
将细胞上清液、样本或标准品直接加入检测板(384 孔低体积白色板,终体积 20 µL),使用 HTRF 试剂检测 CTGF。标记 HTRF 供体和受体的抗体已预先混合,单次加样即可完成操作,进一步简化流程。(标注:human-CTGF-kit 为图表标识,对应 “人 CTGF 检测流程”)
分析性能
批内 / 批间精密度
批内精密度(n=24)
- 样本 1:平均 CTGF 浓度 10.1 ng/mL,变异系数(CV)14.7%
- 样本 2:平均 CTGF 浓度 69.25 ng/mL,CV 10.6%
- 样本 3:平均 CTGF 浓度 475 ng/mL,CV 10%
- 平均 CV:11.7%注:3 个样本各检测 24 次,计算每个样本浓度的 CV 值。
批间精密度(n=4)
- 样本 1:CTGF 浓度 19.2 ng/mL,平均 delta R 值 1100,CV 5%
- 样本 2:CTGF 浓度 131.6 ng/mL,平均 delta R 值 14922,CV 11%
- 样本 3:CTGF 浓度 250 ng/mL,平均 delta R 值 24765,CV 2%
- 平均 CV:6%注:每个样本在 4 个独立实验中检测,计算每个样本浓度的 CV 值。
加标回收率
- 样本 1:重组 CTGF 14.02 ng/mL + 天然 CTGF 15.02 ng/mL,预期浓度 29.04 pg/mL,实测浓度 34.73 pg/mL,回收率 120%
- 样本 2:重组 CTGF 14.02 ng/mL + 天然 CTGF 22.05 ng/mL,预期浓度 36.07 pg/mL,实测浓度 39.1 pg/mL,回收率 108%
- 样本 3:重组 CTGF 25.19 ng/mL + 天然 CTGF 16.88 ng/mL,预期浓度 42.07 pg/mL,实测浓度 42.07 pg/mL,回收率 110%注:向含已知浓度 CTGF 的 MEM+1% BSA 细胞上清液样本中加入不同量的重组 CTGF,按 1:1 体积比混合。将标准曲线获得的响应值与计算的预期值对比,观测到的回收率验证了该检测所用样本基质的适用性。
检测验证
TGFβ 刺激 MRC5 细胞系的 CTGF 分泌检测
将人 MRC5 细胞以 400,000 个细胞 / 孔接种于 12 孔板,加入 600 µL 完全 MEM 细胞培养基,37°C、5% CO₂条件下过夜培养。随后用含不同浓度 TGFβ(0.2–20 ng/mL)的 600 µL MEM+1% 培养基刺激细胞,24 小时后取 16 µL 上清液转移至白色检测板,使用人 CTGF 试剂盒进行分析,室温过夜孵育后记录 HTRF 信号。(标注:human-CTGF-kit 为图表标识,对应 “TGFβ 刺激 MRC5 细胞 CTGF 分泌检测结果”)
产品规格
- 应用领域:蛋白定量(Protein Quantification)
- 品牌:HTRF
- 检测方式:HTRF(均相时间分辨荧光)
- 产品类别:试剂盒(Kit)
- 样本体积:16 µL
- 运输条件:干冰运输(Shipped in Dry Ice)
- 靶标类别:生物标志物(Biomarkers)
- 靶标物种:人(Human)
- 技术平台:TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
- 治疗领域:非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化(NASH/Fibrosis)
- 单位规格:100,000 次检测(100,000 assay points)