产品概述

缺氧诱导因子 - 1α（HIF-1α）是转录因子缺氧诱导因子 - 1（HIF-1）的两个亚基之一，作为缺氧应答的核心调控因子，可激活能量代谢、血管生成、凋亡等相关基因的转录。HIF-1 高表达与肿瘤的侵袭性进展相关，同时通过参与靶细胞葡萄糖摄取过程与糖尿病密切关联，还涉及糖尿病肾病、糖尿病创面修复等并发症的发生发展。

工作原理

检测原理

HIF-1α HTRF 检测采用夹心免疫分析技术，涉及两种特异性抗人 HIF-1α 抗体：一种标记铕穴状化合物（Europium Cryptate，供体），另一种标记 d2（受体）。信号强度与样本中 HIF-1α 的浓度呈正比。检测试剂可预先混合，单次加样直接检测，全程无需洗涤步骤；细胞裂解后，可通过该试剂盒及多数 TR-FRET 多功能酶标仪完成检测。（标注：hif-1-alpha-cellular-kit 为图表标识，对应 “HIF-1α 检测原理”）

检测流程

采用双板实验方案：细胞在同一 96 孔培养板中接种、刺激并裂解，随后将裂解液转移至检测板进行 HIF-1α 检测。该方案可监测细胞活力与汇合度。标记 HTRF 荧光团的抗体可预先混合，单次加样简化流程，按比例调整试剂体积即可适配 96 孔至 384 孔板格式。（标注：hif-1-alpha-cellular-kit 为图表标识，对应 “HIF-1α 检测流程”）

检测验证

HTRF 检测与 Western Blot 对比

人 HeLa 宫颈癌细胞接种于 T175 培养瓶，用完全培养基 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天至 80% 汇合度。经处理（6 小时，10 µM MG-132、1 mM DMOG）后，用 3 mL 补充型 #4 裂解缓冲液室温温和振荡裂解 30 分钟，离心 10 分钟收集可溶性上清液。将细胞裂解液用补充型裂解缓冲液系列稀释，取 16 µL 各稀释液转移至 384 孔低体积白色微孔板，加入 4 µL HIF-1α HTRF 检测试剂，同时取等量裂解液进行 Western Blot 平行对比。结果显示，HTRF 检测仅需 3120 个细胞即可获得最低检测信号，而 Western Blot 需 25,000 个细胞，HTRF 检测灵敏度是 Western Blot 的 8 倍。（标注：hif-1-alpha-cellular-kit 为图表标识，对应 “与 Western Blot 对比结果”）

羟化酶抑制剂与蛋白酶体抑制剂的作用

将小鼠胚胎成纤维细胞 NIH-3T3 以 100,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板，37°C 条件下用不同浓度的羟化酶抑制剂 DMOG（抑制 HIF-1α 羟化）或蛋白酶体抑制剂 MG-132（抑制 HIF-1α 降解）处理 6 小时（每组设 3 个复孔）。移除培养基后，加入 50 µL 补充型 #4 裂解缓冲液，室温温和振荡裂解 30 分钟，取 16 µL 裂解液转移至 384 孔板进行 HTRF 检测。（标注：hif-1-alpha-cellular-kit 为图表标识，对应 “抑制剂作用检测结果”）

HIF-1α 与磷酸化 Erk1/2 的相关性

人 A431 表皮样癌细胞以 100,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板，用 1 mM 去铁胺（DFO）预孵育 30 分钟以防止 HIF-1α 降解，随后用不同浓度的表皮生长因子（EGF）处理 6 小时（37°C），激活 ERK 通路及 HIF-1α 的翻译。移除培养基后，加入 50 µL 补充型 #4 裂解缓冲液，室温温和振荡裂解 30 分钟，取 16 µL 裂解液转移至 384 孔小体积板的两个不同孔中进行平行检测。（标注：hif-1-alpha-cellular-kit 为图表标识，对应 “HIF-1α 与磷酸化 Erk1/2 相关性检测结果”）

IGF-1 刺激诱导 HIF-1α 上调

人 MCF-7 表皮样癌细胞以 50,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板，用 1 mM DFO 预孵育 30 分钟以防止 HIF-1α 降解，随后用不同浓度的胰岛素样生长因子 - 1（IGF-1）处理 6 小时（37°C），激活 AKT 通路及 HIF-1α 的翻译。移除培养基后，加入 50 µL 补充型 #4 裂解缓冲液，室温温和振荡裂解 30 分钟，取 16 µL 裂解液转移至 384 孔低体积白色微孔板进行检测。（标注：hif-1-alpha-cellular-kit 为图表标识，对应 “IGF-1 刺激诱导 HIF-1α 上调检测结果”）

PI3K 抑制剂处理下调 HIF-1α 与磷酸化 AKT

人 MCF-7 表皮样癌细胞以 50,000 个细胞 / 孔接种于 96 孔板，用不同浓度的 1 mM DFO 预孵育 30 分钟以防止 HIF-1α 降解，随后用不同浓度的 PI3K 抑制剂 LY294002 处理 30 分钟（每组设 3 个复孔），抑制 PI3K/AKT 通路。用 10 nM IGF-1 和 1 mM DFO 激活细胞后，移除培养基，加入 50 µL 补充型 #4 裂解缓冲液，室温温和振荡裂解 30 分钟，取 16 µL 裂解液转移至 384 孔小体积板的两个不同孔中进行平行检测。（标注：hif-1-alpha-cellular-kit 为图表标识，对应 “PI3K 抑制剂处理下调检测结果”）

简化通路

HIF-1 由组成型表达的 HIF-1β 亚基（87 kDa）和氧调节的 HIF-1α 亚基（120 kDa）组成，后者含氧量依赖降解域（ODD）。常氧条件下，HIF-1α 的 ODD 域被氧激活的脯氨酰羟化酶（PHDs）羟化，进而被泛素化并通过蛋白酶体快速降解；缺氧条件下，PHD 活性受抑制，HIF-1α 在细胞质中积累并转移至细胞核，与 HIF-1β 异源二聚化后激活，该复合物可激活 100 余种靶基因的转录，通过编码参与血管生成、红细胞生成、细胞增殖 / 存活及炎症相关的蛋白，介导机体对缺氧环境的应答。（标注：hif-1-alpha-cellular-kit 为图表标识，对应 “HIF-1α 简化通路”）

产品规格

• 应用领域：蛋白定量（Protein Quantification）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样本体积：16 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：生物标志物（Biomarkers）
• 靶标物种：人（Human）、鼠（Mouse）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：代谢 / 糖尿病（Metabolism/Diabetes）、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化（NASH/Fibrosis）、肿瘤学与炎症（Oncology & Inflammation）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）