产品概述

亨廷顿蛋白（HTT）是一种在大脑中高表达的细胞质蛋白，其抗凋亡功能对神经元存活至关重要。野生型（WT）HTT 蛋白具有正常功能结构，其多聚谷氨酰胺（polyQ）结构域含有的谷氨酰胺残基数量少于 36 个；突变型 HTT 蛋白则携带异常延长的 polyQ 结构域（>36 个残基），导致蛋白失去功能并发生聚集。HTT 聚集会引发选择性神经元死亡，这是亨廷顿舞蹈症（Huntington's Disease）的致病机制。

工作原理

检测原理

突变型 HTT 检测基于 TR-FRET 夹心免疫分析技术，涉及两种特异性抗体：一种标记铽穴状化合物（Tb³⁺ cryptate，供体），另一种标记 d2（受体）。其中一种抗体靶向蛋白的 N 端区域，另一种特异性识别突变型 polyQ 结构域。两种抗体均可结合可溶性突变型 HTT，供体与受体的近距离接触产生荧光 TR-FRET 信号，信号强度与样本（细胞裂解液或组织裂解液）中可溶性突变型 HTT 的浓度直接成正比。（标注：human-mouse-mutant-huntingtin-detection-kit 为图表标识，对应 “突变型 HTT 检测原理”）

检测流程

突变型 HTT 检测可在 96 孔或 384 孔低体积白色检测板中进行（终体积 20 µL）。将样本（细胞 / 组织裂解液）或标准品直接加入检测板，使用 HTRF 试剂检测突变型 HTT。标记 HTRF 荧光团的抗体可预先混合，单次加样完成检测，全程无需洗涤步骤。按比例调整各试剂添加体积，即可实现检测规模的微型化或扩大化。（标注：human-mouse-mutant-huntingtin-detection-kit 为图表标识，对应 “突变型 HTT 检测流程”）

检测详情

• 样本量：10 µL
• 检测终体积：20 µL
• 出结果时间：室温下过夜
• 试剂盒组件：冷冻检测抗体、缓冲液及实验方案
• 检测限（LOD）与定量限（LOQ）（#2 裂解缓冲液中）：1.7 ng/mL 和 5.5 ng/mL
• 检测范围：5.5–500 ng/mL
• 物种交叉反应性：人、鼠、大鼠
• 检测特异性：可溶性突变型 HTT 形式

分析性能

突变型 HTT 标准曲线

分别购买重组野生型小鼠 HTT-Q7（Coriell Institute，#CH02324）、突变型人 HTT-Q48（Coriell Institute，#CH02580）和突变型人 HTT-Q73（Coriell Institute，#CH02581）蛋白，按照试剂盒说明书流程在 #2 裂解缓冲液（1X）中进行系列稀释。以 delta 比值表示 HTRF 信号，绘制信号强度与检测的 HTT 浓度关系曲线。结果显示，该检测可定量含不同长度 polyQ 结构域的突变型 HTT 蛋白（本实验检测 Q48 和 Q73），但不识别野生型 HTT 蛋白，与预期一致。（标注：human-mouse-mutant-huntingtin-detection-kit 为图表标识，对应 “突变型 HTT 标准曲线”）

检测精密度

批内精密度（n=24）

• 样本 1：突变型人 HTT-Q73 浓度 15.6 ng/mL，变异系数（CV）7%
• 样本 2：突变型人 HTT-Q73 浓度 62.5 ng/mL，CV 5%
• 样本 3：突变型人 HTT-Q73 浓度 250 ng/mL，CV 6%
• 平均 CV：6%注：3 个样本分别为低、中、高三种浓度的重组突变型人 HTT-Q73 蛋白（溶于 #2 裂解缓冲液 1X），每个样本检测 24 次，计算 CV 值。

批间精密度（n=3）

• 样本 1：突变型人 HTT-Q73 浓度 15.6 ng/mL，CV 8%
• 样本 2：突变型人 HTT-Q73 浓度 62.5 ng/mL，CV 3%
• 样本 3：突变型人 HTT-Q73 浓度 250 ng/mL，CV 2%
• 平均 CV：4.3%注：3 个样本分别为低、中、高三种浓度的重组突变型人 HTT-Q73 蛋白（溶于 #2 裂解缓冲液 1X），每个样本在 3 个独立实验中检测，计算 CV 值。

检测验证

野生型与突变型 HTT 小鼠模型脑组织样本分析

使用亨廷顿舞蹈症临床前研究中应用最广泛的敲入小鼠模型 —— 症状前 zQ175 小鼠及其野生型同窝小鼠（Landles C. 等，Brain Commun. 2021; 3 (1):fcaa231）的脑组织验证该试剂盒。按照试剂盒说明书流程裂解 3 只野生型小鼠（#1、#2、#3）和 3 只突变型 zQ175 小鼠（#4、#5、#6）的皮质和小脑组织：用添加蛋白酶抑制剂的冰浴 #2 裂解缓冲液 1X 制备 5%（w/v）组织匀浆，离心去除含潜在突变型 HTT 聚集体的不溶性组分，取含可溶性 HTT 蛋白的上清液，分别用突变型 HTT 试剂盒、总 HTT 试剂盒（货号 64HTTTPEG/H）检测；同时用 GAPDH 试剂盒（货号 64GAPDHPEG/H）检测管家蛋白 GAPDH 水平，验证样本蛋白提取效率的一致性。检测前将裂解液用添加蛋白酶抑制剂的 #2 裂解缓冲液 1X 预稀释（突变型 HTT 检测 1:8 稀释，总 HTT 检测 1:4 稀释，GAPDH 检测 1:100 稀释），确保检测物浓度在试剂盒线性范围内。结果显示，所有样本的 GAPDH 水平相近（绿色条），表明组织裂解液的总蛋白含量一致；野生型小鼠样本的突变型 HTT 检测无信号，而症状前 zQ175 小鼠的皮质和小脑组织中可清晰检测到可溶性突变型 HTT（蓝色条）；所有裂解液中均检测到可溶性总 HTT 蛋白（野生型 + 突变型，红色条），且其水平与突变型 HTT 蛋白的微小波动高度相关。（标注：human-mouse-mutant-huntingtin-detection-kit 为图表标识，对应 “小鼠脑组织样本检测结果”）

HTRF 与 Western Blot 检测脑组织中突变型和总 HTT 的平行对比

取 1 只野生型小鼠和 1 只症状前 zQ175 小鼠的多种脑组织（皮质、海马、小脑），按照上述方法制备含可溶性 HTT 蛋白的上清液，分别用 HTRF 突变型 / 总 HTT 试剂盒和 Western Blot 进行平行检测。检测前根据不同方法的线性范围预稀释裂解液（HTRF：突变型 HTT 检测 1:8 稀释，总 HTT 检测 1:4 稀释；Western Blot：两种检测均 1:20 稀释）。结果显示，HTRF 与 Western Blot 的检测结果具有一致性：两种方法均未在野生型小鼠脑组织中检测到可溶性突变型 HTT，而在症状前 zQ175 小鼠的所有脑组织样本中均能准确定量该蛋白；所有裂解液中均检测到可溶性总 HTT 蛋白（野生型 + 突变型），且其水平与三种脑组织中突变型 HTT 的差异高度相关。（标注：human-mouse-mutant-huntingtin-detection-kit 为图表标识，对应 “HTRF 与 Western Blot 对比结果”）

产品规格

• 应用领域：蛋白定量（Protein Quantification）
• 自动化兼容性：是（Yes）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 裂解缓冲液兼容性：#2 裂解缓冲液、#3 裂解缓冲液
• 产品类别：试剂盒（Kit）
• 样本体积：10 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：生物标志物（Biomarkers）
• 靶标物种：人（Human）、鼠（Mouse）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：神经科学（Neuroscience）
• 单位规格：500 次检测（500 assay points）