BRD9(含 BRD9 溴结构域蛋白 9)是含溴结构域蛋白家族 IV 的成员,该家族还包括 BRD7。BRD9 是 SWI/SNF(GBAF 或 ncBAF)复合体的亚基,可结合组蛋白的乙酰化赖氨酸残基,介导染色质重塑和转录调控。BRD9 参与多能性调节和细胞发育。
BRD9 过表达与神经发育障碍以及急性髓系白血病等癌症相关。最近,通过 PROTAC 分子靶向 BRD9 降解已成为一种新颖且有前
景的治疗方法。然而,BRD9 和 BRD7 蛋白有 72% 的氨基酸残基相似性,因此化合物很可能同时靶向原癌基因 BRD9 和抑癌基因 BRD7。因此,必须仔细研究靶向 BRD9 或 BRD7 的化合物的选择性。为此,HTRF 总 BRD7 检测试剂盒是 HTRF 总 BRD9 检测试剂盒的重要配套检测工具,可实现可靠的化合物分析。
HTRF 总 BRD9 检测可定量细胞裂解物中 BRD9 的表达水平。与蛋白质印迹法不同,该检测完全基于微孔板,无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 BRD4 检测使用两种标记抗体:一种与供体荧光团偶联,另一种与受体荧光团偶联。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 BRD9 时,添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近,从而产生 FRET 信号。其强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比,并为在无需洗涤的检测格式下评估蛋白质表达提供了一种方法。
HTRF 总 BRD9 检测原理
双板方案包括先在 96 孔板中培养细胞,然后裂解细胞,再将裂解物转移到 384 孔小体积检测板中,之后添加总 BRD9 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。
HTRF 总 BRD9 双板检测方案
使用 HTRF 试剂检测总 BRD9 可在单个用于培养、刺激和裂解的板中进行。无需洗涤步骤。这种高通量筛选设计的方案能够实现微型化,同时保持稳定的 HTRF 质量。
HTRF 总 BRD9 单板检测方案
将贴壁人细胞系 MCF7 和 MDA-MB-543 细胞(乳腺)、HELA(宫颈)、SH-SY5Y(骨髓神经母细胞)以及小鼠细胞系 NIH3T3 和 Neuro2A 以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔培养板中,在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。移除培养基后,用 50µL 补充的 4 号裂解缓冲液(1X)裂解细胞。
将悬浮免疫人 PL-21 细胞系(急性髓系白血病)以 100,000 个细胞 / 孔的密度、30µL / 孔的量接种到 96 孔板中,在 37°C、5% CO₂条件下孵育 1 小时,然后用 10µL 补充的 4 号裂解缓冲液(4X)裂解。