核心结论

人 / 小鼠 TGF-β1 检测试剂盒是基于 HTRF 技术的均相定量工具，需通过酸激活 - 中和步骤实现总 TGF-β1（活性形式 + TGFβ1-LAP 复合物）的精准检测，灵敏度达 4 pg/mL、特异性强（不与 TGF-β2/β3 交叉反应），适配代谢 / 糖尿病、NASH / 纤维化及肿瘤炎症相关研究，支持人、小鼠、牛等多物种样本（可耐受最高 5% 胎牛血清），操作简便且支持高通量检测。

产品概述

转化生长因子 β1（TGF-β1）是调控细胞外基质（ECM）合成与降解的核心细胞因子，也是关键的促纤维化因子。其前体蛋白经加工后生成潜伏相关肽（LAP）与成熟 TGF-β1 肽段，二者通过强非共价相互作用形成复合物，需经激活步骤（MMP2 酶切或酸激活）才能释放活性形式的 TGF-β1，进而被检测。血清样本检测需高灵敏度，AlphaLISA 技术可满足低水平分析物检测需求；检测时需遵循推荐方案，避免使用严重溶血样本。

工作原理

激活步骤

样本及细胞上清液中同时存在 TGF-β1 活性形式与 TGFβ1-LAP 复合物，需先经酸激活处理，再进行中和反应，才能实现总 TGF-β1 的全面检测（样本激活可遵循右侧任一推荐方案）。试剂盒已配套提供激活步骤所需试剂，无需额外准备，极大提升实验便利性。激活后的标准品和样本直接加入白色低体积检测板，通过 HTRF 试剂完成定量检测。（标注：1cytokines-how-it-works-activation-step-tgf-beta-1-62htgfbpeg-62htgfbpeh.svg 为图表标识，对应 “TGF-β1 检测激活步骤”）

检测原理

激活后的样本、细胞上清液或标准品直接加入检测板（384 孔低体积白色板或 Revvity 低体积 96 孔板），终体积 20 µL。HTRF 供体和受体标记的抗体已预混，单次加样即可完成反应，大幅简化操作流程。检测可灵活适配至 1536 孔板格式，仅需按比例调整各试剂添加体积。（标注：1cytokines-how-it-works-assay-principle-human-il13-62hil13peg-62hil13peh.svg 为原文引用图表标识，实际应为 “TGF-β1 检测原理”）

数据分析

推荐使用 4 参数逻辑（4PL）曲线拟合标准曲线，相比线性分析，能在更宽浓度范围内准确量化未知样本，完美适配细胞因子检测等生物系统分析场景。Revvity 与Myassays.com合作提供专业数据分析支持，可通过对应链接获取免费在线 TGF-β1 分析软件。

检测详情

技术规格

• 样本量：16 µL
• 最终检测体积：20 µL
• 试剂盒组分：冻干标准品、冷冻检测抗体、缓冲液及实验方案
• 检测限（LOD）（稀释液中）：4 pg/mL
• 定量限（LOQ）（稀释液中）：19 pg/mL
• 检测范围：19–2000 pg/mL
• 出结果时间：室温过夜（ON at RT）
• 校准公式：NIBSC（89/514）值（U/mL）= 0.017 × HTRF 人源 TGF-β1 值（pg/mL）
• 适用物种：人（Human）、小鼠（mouse）、牛（bovine，可耐受最高 5% 胎牛血清）；基于序列同源性，预计适用于其他物种；不检测鸡 TGF-β1
• 特异性：不与人 TGF-β2 和 TGF-β3 发生交叉反应

分析性能

批内精密度（n=24）

• 每个样本重复检测 24 次，计算浓度变异系数（% CV）
• 样本 1：TGF-β1 均值 28 pg/mL，CV 7%
• 样本 2：TGF-β1 均值 167 pg/mL，CV 8%
• 样本 3：TGF-β1 均值 704 pg/mL，CV 4%
• 平均 CV：6%，体现优异的实验重复性

批间精密度（n=4）

• 每个样本在 4 个独立实验中检测，计算浓度变异系数（% CV）
• 样本 1：TGF-β1 含量 32 pg/mL，delta 比值均值 114，CV 3%
• 样本 2：TGF-β1 含量 126 pg/mL，delta 比值均值 410，CV 6%
• 样本 3：TGF-β1 含量 322 pg/mL，delta 比值均值 1441，CV 2%
• 平均 CV：4%，确保不同实验批次间的结果稳定性

检测验证

1. 离子霉素和 PMA 刺激人 PBMC 分泌 TGF-β1

• 实验流程：人 PBMC 以 1.25×10⁵个 / 孔接种到 96 孔板，培养基为含 4% 胎牛血清的 RPMI；用 1 µg/mL 离子霉素和 0.5–50 ng/mL 梯度浓度 PMA 刺激 18 小时；取 50 µL 上清液转移至聚丙烯微量离心管，加入 5 µL 酸激活试剂室温处理 10 分钟，再加入 5 µL 中和试剂；取 16 µL 处理后的样本转移至白色检测板进行分析。
• 推荐对照设置：仅含完全培养基的空白对照（用于测定刺激培养基中的 TGF-β 背景值）、完全培养基中未刺激的细胞对照（用于测定基础 TGF-β 浓度）。

（标注：2assay-validation-tgf-beta-1-1.svg 为图表标识，对应 “人 PBMC 分泌 TGF-β1 验证”）

2. LPS 刺激永生化小鼠库普弗细胞分泌 TGF-β1

• 实验流程：永生化小鼠库普弗细胞（ImKC）以 6.5×10⁵个 / 孔接种到 24 孔板，培养基为含 4% 胎牛血清的 RPMI；静置培养 24 小时后，用 0.05–5 µg/mL 梯度浓度 LPS 刺激 16 小时（终体积 500 µL / 孔）；取 100 µL 上清液，加入 10 µL 酸激活试剂室温处理 10 分钟，再加入 10 µL 中和试剂；取 16 µL 激活后的上清液转移至 384 孔低体积白色检测板，用人源 TGF-β1 检测试剂盒进行分析。

（标注：3assay-validation-tgf-beta-1-2.svg 为图表标识，对应 “小鼠库普弗细胞分泌 TGF-β1 验证”）

产品规格

• 应用领域：Protein Quantification（蛋白定量）
• 品牌：HTRF
• 检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
• 产品类别：Kit（试剂盒）
• 样本体积：16 µL
• 运输条件：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
• 靶标类别：Cytokines（细胞因子）
• 靶标物种：Human（人）、Mouse（小鼠）
• 技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
• 治疗领域：Metabolism/Diabetes（代谢 / 糖尿病）、NASH/Fibrosis（非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化）、Oncology & Inflammation（肿瘤学与炎症）
• 单位规格：100,000 次检测（100,000 assay points）