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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Prot-prot interac > HTRF STREPTAVIDIN-EU - 20K PTS Eu标记的链霉亲和素- 20,000测试

产品概述

该抗体属于 IgG2b 型,以十二氨基酸肽序列 CYPYDVPDYASL 为抗原制备而成,且标记了 XL665。可特异性识别流感病毒血凝素表位 YPYDVPDYA,该表位常作为通用表位标签应用于各类表达载体中。此试剂适用性广泛,既能用于生化层面实验,也能应用于细胞层面实验,可助力研究蛋白 / 蛋白、蛋白 / 肽、蛋白 / DNA、蛋白 / RNA、蛋白 / 碳水化合物、受体 / 配体等多种物质间的相互作用。依托 HTRF 技术,其能检测的亲和力常数范围跨度大,从皮摩尔级别延伸至低毫摩尔级别。(标注:htrf mab anti ha-xl665,对应 “抗 HA-XL665 单克隆抗体检测原理示意图”)

工作原理

检测原理

在 HTRF 相互作用检测体系里,参与作用的两个物质,一个会直接或间接标记供体,另一个则直接或间接标记受体,检测到的信号强度和两个物质的结合程度呈正相关。具体到该抗体的应用示例,抗 HA-XL665 单克隆抗体会与带 HA 标签的结合物 A 相结合,而结合物 B 可与标记了 HTRF 供体的特异性抗体结合。若结合物 B 经过生物素化、标签标记、Fc 融合修饰,可选用对应且标记了供体的 HTRF 试剂完成检测。

检测流程

以 20 微升为最终反应体积检测带 HA 标签的结合物 A 与无标记的结合物 B 的相互作用时,流程如下:先加入 10 微升的两种结合物并进行孵育;接着加入 5 微升抗 HA-XL665 单克隆抗体和 5 微升标记供体的抗结合物 B 抗体,再次孵育后即可读取检测信号。若结合物 B 有生物素化、标签标记、Fc 融合修饰或直接标记,需更换对应标记供体的 HTRF 试剂检测。(标注:htrf mab anti ha-xl665,对应 “抗 HA-XL665 单克隆抗体检测流程示意图”)

检测详情

试剂供应与活性部分说明

试剂按检测次数售卖,单次检测反应体积为 20 微升。其中偶联 XL665 或 d2 的抗体,供应标准为每孔 20 纳克抗体。每瓶试剂不仅会标注活性部分含量,还会标明示踪剂数量,这里的活性部分指的是偶联物中具备活性的成分。结合该抗体 5,000 次检测对应 5-10 微克活性部分推算,1,000 次检测对应的活性部分含量约为 1-2 微克。

检测次数与活性部分的关联

每孔内的平均偶联物量能反映生物材料的总含量,相比总偶联物量,优先参考活性部分含量。像铕穴状化合物和 d2 偶联物,因标记物分子量极小,总偶联物量和活性部分含量一致;但 XL665 标记物的总偶联物量会随偶联物最终摩尔比变化,不过其活性部分含量由 Revvity 供应,会依据订购的检测次数保持恒定。

抗体核心参数

  • 表位 / 物种:HA
  • 抗体型号:MAb HAS01
  • 活性部分含量:1,000 次检测约 1-2 微克
  • 物种及亚型:小鼠 IgG2b
  • 特异性:YPYDVPDYA 肽段

推荐使用浓度

铕穴状化合物偶联物浓度不能过高,否则会造成读数仪饱和且背景值超标,通常 1-5 纳摩尔的浓度较为合适,搭配兼容 HTRF 的读数仪,在 620 纳米处可产生 20,000-80,000 计数 / 秒的信号。而 XL665 偶联物浓度需尽量贴合检测对应物浓度,若要检测 20 纳摩尔浓度的标记分子,抗标签 - XL665 的浓度需达到同等水平或更高。

产品规格

  • 应用领域:蛋白 - 蛋白相互作用检测
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF
  • 产品类别:荧光试剂
  • 运输条件:常温运输
  • 靶标类别:结合检测
  • 技术平台:TR-FRET
  • 治疗领域:心血管疾病、感染性疾病、炎症、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
  • 单位规格:1,000 次检测


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