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LANCE ULTRA E-CADHERIN (HU),LYOPH(0.3UG)

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品牌： Revvity

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上海普纳生物技术有限公司
敲除细胞（产品目录参考：Revvity Horizon Discovery 产品 HAP1 KO KRAS #HZGHC005816c001）的裂解物，用 HTRF 总 KRAS 试剂盒检测以验证 KRAS 检测的特异性，确保检测 KRAS 时不与 NRAS 和 HRAS 发生交叉反应。


结果显示，在表达 NRAS 和 HRAS 的 HAP-1 KRAS 敲除细胞中未检测到 HTRF 信号，证实该试剂盒仅特异性检测 KRAS。


检测验证
检测验证

多种细胞系中总 KRAS 表达水平的定量

制备不同 12 号密码子基因型的商用细胞系裂解物，用 HTRF 总 KRAS 试剂盒检测。所有受测细胞系均检测到显著的 KRAS 表达（见表）。


在三种 KRAS G12C 纯合细胞模型和一种 WT/G12C 杂合细胞模型中，用 HTRF 总 KRAS 试剂盒监测 KRAS 水平，同时用 HTRF α- 微管蛋白内参细胞检测试剂盒（64ATUBPEG/H）检测 α- 微管蛋白作为参考基因。


商用细胞系包括：HT-29（纯合野生型）、RKO（纯合野生型）、HCT-116（纯合野生型）、SW1463（纯合 G12C）、SW1573（纯合 G12C）、Mia-PaCa-2（纯合 G12C）、Calu-1（纯合 G12C）、AsPC-1（纯合 G12D）、SW480（纯合 G12V）、NCI-H358（杂合 G12C / 野生型），均通过 HTRF 总 KRAS 试剂盒检测到 KRAS 表达。


检测验证
检测验证

HTRF 总 KRAS 检测与蛋白质印迹法的比较

SW480 细胞在 T175 培养瓶的完全培养基中于 37°C、5% CO₂条件下培养至 80% 汇合度。移除培养基后，用 3 mL 补充的 1X 裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。


检测验证
用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液转移至低体积白色微孔板，加入 4 µL HTRF 总 KRAS 检测试剂。取等量裂解物进行 HTRF 与蛋白质印迹法的平行比较。


结果显示，HTRF 总 KRAS 检测在 4000 个细胞 / 孔即可检测到显著信号，而蛋白质印迹法需 31000 个细胞 / 孔才能获得最小化学发光信号。因此，在此条件下，HTRF 总 KRAS 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 7.5 倍。


简化通路


KRAS 信号通路

KRAS 是一种小型 GTP 酶，作为分子开关在活性 GTP 结合状态与非活性 GDP 结合状态之间循环。受上游信号（如生长因子与受体酪氨酸激酶（RTKs）结合）激活后，KRAS 会激活多个下游效应通路，其中最主要的是 RAF-MEK-ERK 通路和 PI3K-AKT 通路。RAF-MEK-ERK 通路促进细胞增殖和分化，PI3K-AKT 通路则支持细胞存活和代谢。KRAS 的突变（尤其是 12、13 和 61 号密码子突变）会使其锁定在活性状态，导致细胞失控分裂并引发癌症。这种失调在胰腺癌、结直肠癌和肺癌等多种癌症中较为常见。


简化通路


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