登录 • 注册 购物车 15868425995
库存查询 在线订购

当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > ALPHALISA HPDL-1 KIT,100PTS

/

ALPHALISA HPDL-1 KIT,100PTS

分享给好友
下载产品资料
下载SDS
收藏 咨询

品牌： Revvity

  • 产品详情
  • 相关解决方案
  • 相关资源
  • 相关视频
  • 相关问答
    没有数据
    没有数据
    没有数据
货号：AL355HV
一键复制
参考价格 ¥ 12416.79
产品规格
  • ￥12416.79
参考货期：3-4周
选择数量
当前规格1件起购
加入购物车 询价
相关产品推荐
上海普纳生物技术有限公司
; font-family: Inter, -apple-system, BlinkMacSystemFont, "Segoe UI", "SF Pro SC", "SF Pro Display", "SF Pro Icons", "PingFang SC", "Hiragino Sans GB", "Microsoft YaHei", "Helvetica Neue", Helvetica, Arial, sans-serif; text-wrap-mode: wrap; background-color: rgb(255, 255, 255);"/>

assay-validation-mkk4-phospho-s257-2

茴香霉素对 HepG2 细胞的剂量反应及与蛋白质印迹法的相关性

将人 HepG2 细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔板中。在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时后，用不同浓度的茴香霉素刺激 45 分钟。随后移除培养基，加入 50 µL 1X 补充裂解缓冲液。在室温下轻轻振荡裂解 30 分钟后，将 16 µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 磷酸化 MKK4（Ser257）或总 MKK4 检测试剂。室温过夜孵育后记录 HTRF 信号。同时，取等量裂解物通过蛋白质印迹法进行平行实验分析。


结果如图表所示，HTRF 检测和蛋白质印迹法均显示 MKK4 磷酸化水平升高，同时 MKK4 表达水平下降。


assay-validation-mkk4-phospho-s257-3


assay-validation-mkk4-phospho-s257-4

HTRF 磷酸化 MKK4（Ser257）细胞检测与蛋白质印迹法的比较

将人 HepG2 细胞系接种到 T175 培养瓶中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育。随后用 1 M 山梨糖醇刺激细胞 30 分钟，然后进行裂解。


用补充裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液转移至低体积白色微孔板中，然后加入 4 µL HTRF 磷酸化 MKK4（Ser257）检测试剂。取等量裂解物通过 HTRF 检测与蛋白质印迹法进行平行对比。


使用 HTRF 磷酸化 MKK4（Ser257）检测时，每孔仅需 310 个细胞即可检测到信号；而依赖化学发光信号的蛋白质印迹法则需要 5,000 个细胞。这些结果表明，HTRF 磷酸化 MKK4（Ser257）检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 16 倍。


assay-validation-mkk4-phospho-s257-5


简化通路

MKK4 检测的简化通路
MKK4（丝裂原活化激酶激酶 4）是 MAP 激酶激酶家族的成员。在 G 蛋白偶联受体（GPCR）激活、生长因子、细胞应激或炎症细胞因子等刺激下，TAK1 或 ASK1 等不同的 MAP 激酶激酶激酶（MKKK）被激活，进而诱导 MKK4 的 Ser257 位点发生磷酸化，使 MKK4 激活。激活的 MKK4 反过来会磷酸化 JNK 或 p38，从而激活 c-jun、p53 或 ATF2，并通过调控基因转录诱导炎症、细胞存活 / 凋亡、增殖或分化过程。


phospho-pathway-mkk4-phospho-s257-64mk4peg


规格参数


其他规格



    没有数据
    没有数据
    没有数据
货号：64MK4PEH
一键复制
参考价格 ¥ 178104.09
产品规格
  • ￥178104.09
参考货期：3-4周
选择数量
当前规格1件起购
加入购物车 询价
相关产品推荐
上海普纳生物技术有限公司