概述
总 AP2 细胞检测可监测总 AP2β，用于检测各类细胞中内源性或过表达的 AP2β 的表达情况。AP2β 是衔接蛋白复合体 2（AP-2）的组成部分，已知其作为货物蛋白发挥作用。它们在细胞中扮演多种角色，包括通过与 β- 抑制蛋白直接相互作用，经由网格蛋白依赖的内吞过程实现 G 蛋白偶联受体（GPCRs）的内化。AP2β 功能的改变会导致细胞对激素、神经递质或感觉信号等刺激的反应出现特异性减弱。由于 AP2 在多种组织中表达，因此人们认为 AP2 可能通过影响受体介导的信号传导，在多种癌症或其他人类疾病（如糖尿病）中发挥重要作用。
工作原理
总 AP2 检测原理
总 AP2 检测用于定量细胞裂解物中 AP2β 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 AP2 检测使用两种标记抗体，一种偶联有供体荧光团，另一种偶联有受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 AP2 时，加入这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。其信号强度与样品中该蛋白的浓度直接成正比，并提供了一种在无需洗涤的检测形式中评估蛋白质表达的方法。
总 AP2 双板检测方案
使用均相时间分辨荧光（HTRF）试剂检测总 AP2 可在单个培养板中进行，该培养板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。
总 AP2 单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测总 AP2 可在单个培养板中进行，该培养板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为 HTS 设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。
检测验证
HTRF 总 AP2 检测与蛋白质印迹法的比较
将 HEK293 细胞在含完全培养基的 T175 培养瓶中培养，温度为 37°C、CO₂浓度为 5%。孵育 72 小时后，用 3mL 的 4# 裂解缓冲液（1X）在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。使用裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 13µL 各稀释液转移至低容量白色微孔板中，然后加入 3µL 裂解缓冲液 + 4µL HTRF 总 AP2 检测试剂。使用等量的裂解物对 HTRF 检测和蛋白质印迹法进行平行比较。蛋白质印迹法与 HTRF 的平行比较表明，至少在这些实验条件下，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 16 倍。
