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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > HTRF MAB ANTI HA-D2 - 20K PTS 凝集素d2测量试剂- 20,000测试

产品概述

抗 HA-d2 单克隆抗体为 IgG2b 型,针对十二氨基酸肽序列 CYPYDVPDYASL 制备并标记 d2。可识别流感病毒血凝素表位 YPYDVPDYA,该表位已广泛用作表达载体中的通用表位标签。该试剂适用于生化和细胞水平的多种相互作用研究,包括蛋白 / 蛋白、蛋白 / 肽、蛋白 / DNA、蛋白 / RNA、蛋白 / 碳水化合物、蛋白 / 小分子、受体 / 配体相互作用。HTRF 技术可检测的亲和力常数范围广泛,涵盖皮摩尔至低毫摩尔级别。(标注:htrf mab anti ha-d2,对应 “抗 HA-d2 单克隆抗体检测原理示意图”)

工作原理

检测原理

在 HTRF 相互作用检测中,一个结合伴侣标记供体,另一个标记受体。信号强度与两个伴侣的结合程度成正比。示例流程:抗 HA-d2 单克隆抗体与 HA 标签标记的结合伴侣 A 结合,结合伴侣 B 与标记 HTRF 供体的特异性抗体结合。结合伴侣 B 也可进行生物素化、标签标记、Fc 融合修饰,此时需使用相应的 HTRF 试剂标记供体进行检测。

检测流程

以 20 微升最终反应体积检测 HA 标签标记的结合伴侣 A 与非标记结合伴侣 B 的相互作用为例:加入两种结合伴侣(10 微升),孵育后加入抗 HA-d2 单克隆抗体(5 微升)和标记供体的抗结合伴侣 B 抗体(5 微升),孵育后读取信号。结合伴侣 B 也可进行生物素化、标签标记、Fc 融合修饰或直接标记,此时需使用相应的 HTRF 试剂标记供体进行检测。(标注:htrf mab anti ha-d2,对应 “抗 HA-d2 单克隆抗体检测流程示意图”)

检测详情

定制化 HTRF 相互作用检测

试剂按检测次数销售。偶联 XL665 或 d2 的抗体按每孔 20 纳克抗体供应,每瓶提供活性部分含量及示踪剂数量。活性部分指偶联物的活性成分。

检测次数与活性部分的关系

每孔平均偶联物量反映总生物材料含量,优先使用活性部分含量而非总偶联物量。铕穴状化合物和 d2 偶联物的总偶联物量等于活性部分含量;XL665 标记物的总偶联物量因摩尔比不同而异,但活性部分含量恒定,基于订购的检测次数确定。

推荐使用浓度

铕穴状化合物偶联物浓度需避免过高导致读数仪饱和及背景过高,多数情况下 1-5 纳摩尔浓度适宜,在兼容 HTRF 的读数仪上 620 纳米处可产生 20,000-80,000 计数 / 秒。XL665 偶联物浓度需尽可能与检测对应物匹配,确保最大数量的生物分子被 XL665 受体标记。检测 20 纳摩尔浓度的标记分子时,抗标签 - XL665 浓度应相当或更高。

产品规格

  • 应用领域:蛋白 - 蛋白相互作用检测
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF
  • 产品类别:荧光试剂
  • 运输条件:干冰运输
  • 靶标类别:结合检测
  • 技术平台:TR-FRET
  • 治疗领域:心血管疾病、感染性疾病、炎症、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
  • 单位规格:20,000 次检测


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al-text-line-height); overflow-anchor: auto; font-family: Inter, -apple-system, BlinkMacSystemFont, "Segoe UI", "SF Pro SC", "SF Pro Display", "SF Pro Icons", "PingFang SC", "Hiragino Sans GB", "Microsoft YaHei", "Helvetica Neue", Helvetica, Arial, sans-serif; text-wrap-mode: wrap; background-color: rgb(255, 255, 255); color: var(--md-box-samantha-normal-text-color) !important;">human-mouse-total-CDK9-detection-kit(人 / 小鼠总 CDK9 检测试剂盒)

使用 CDK9 PROTAC 降解总 CDK9

将 HeLa 细胞以 50,000 个细胞 / 孔的密度接种在 96 孔培养处理板的完全培养基中,在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。然后用溶媒(DMSO)、CDK9 PROTAC(沙利度胺 - SNS-032)、CDK9 结合剂(SNS-032)、CRBN 结合剂(沙利度胺)或 1µM 无关 PROTAC 在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 4 小时。用 50µL 补充的 1 号裂解缓冲液裂解细胞后,将相同的裂解物依次分装到小体积检测白色板中:16µL 用于总 CDK9 检测,另外 4µL(补充有 12µL 11 号稀释剂)用于使用 HTRF GAPDH 管家试剂盒(64GAPDHPET/G/H)检测 GAPDH 水平。加入 4µL 相应的试剂盒检测试剂,过夜孵育后记录 HTRF 信号。与经溶媒(DMSO)处理的细胞相比,CDK9 PROTAC(沙利度胺 - SNS-032)诱导 CDK9 蛋白降解,信号降低 84%。经 CDK9 结合剂、CRBN 结合剂或无关 PROTAC 处理的细胞未观察到信号降低。在所有测试条件下,测得的 GAPDH 水平保持不变(无细胞毒性)。


human-mouse-total-CDK9-detection-kit(人 / 小鼠总 CDK9 检测试剂盒)


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HeLa 和 MCF7 细胞中总 CDK9 的降解

将 HeLa 和 MCF7 细胞以 50,000 个细胞 / 孔的密度接种在 96 孔培养处理板的完全培养基中,在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。然后用递增浓度的 CDK9 PROTAC(沙利度胺 - SNS-032)在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 4 小时。用 50µL 补充的 1 号裂解缓冲液裂解细胞后,将相同的裂解物依次分装到小体积检测白色板中:16µL 用于总 CDK9 检测,另外 4µL(补充有 12µL 11 号稀释剂)用于使用 HTRF GAPDH 管家试剂盒(64GAPDHPET/G/H)检测 GAPDH 水平。加入 4µL 相应的试剂盒检测试剂,过夜孵育后记录 HTRF 信号。


正如预期,结果显示 HeLa 和 MCF7 细胞经 CDK9 PROTAC 处理后,总 CDK9 呈剂量依赖性降解(半数最大降解浓度分别为 166nM 和 60nM),而 GAPDH 水平保持恒定。


human-mouse-total-CDK9-detection-kit(人 / 小鼠总 CDK9 检测试剂盒)


human-mouse-total-CDK9-detection-kit(人 / 小鼠总 CDK9 检测试剂盒)

HTRF 总 CDK9 检测与蛋白质印迹法的比较

将 HeLa 细胞在 T175 培养瓶中的完全培养基中于 37°C、5% CO₂条件下培养。孵育 48 小时后,用 3mL 补充的 1 号裂解缓冲液(1X)在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。


使用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释,将 16µL 每种稀释液转移至小体积白色微孔板中,然后加入 4µL HTRF 总 CDK9 检测试剂。使用等量的裂解物对 HTRF 检测与蛋白质印迹法进行平行比较。


使用 HTRF 总 CDK9 检测时,300 个细胞 / 孔就足以检测到显著信号,而使用带有 ECL 检测的蛋白质印迹法则需要 10,000 个细胞。因此,在这些条件下,HTRF 总 CDK9 检测的灵敏度是蛋白质印迹技术的 32 倍。


human-mouse-total-CDK9-detection-kit(人 / 小鼠总 CDK9 检测试剂盒)


简化通路

CDK9 在细胞分裂周期中的作用

传统上,CDK 分为两个亚家族成员:协调细胞周期进程的 CDK(CDK1、CDK2、CDK4 和 CDK6)以及转录 CDK(CDK7、CDK8、CDK9、CDK12 和 CDK13)。


CDK9(细胞周期蛋白依赖性激酶 9)与周期蛋白 T 或 K 结合,是多蛋白复合体 TAK/P-TEFb 的组成部分,通过磷酸化 RNA 聚合酶 II(RNAP II)的 C 末端尾域(CTD)来调控转录延伸。CDK9 是成熟 RNA 生成过程中的关键参与者。


human-mouse-total-CDK8-detection-kit(人 / 小鼠总 CDK8 检测试剂盒)


规格


其他规格


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货号:64CDK9TPEG
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  • 1盒/500测试 ¥30615.71
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