产品概述

抗 GST-d2 单克隆抗体是一种靶向经 d2 标记的谷胱甘肽 S - 转移酶的 IgG2a 型抗体。实验证实，该抗体可与多种表达载体所表达的 GST 标签融合蛋白发生反应。该试剂可用于生化及细胞层面的实验，研究多种类型的相互作用，包括蛋白 - 蛋白、蛋白 - 多肽、蛋白 - DNA、蛋白 - RNA、蛋白 - 碳水化合物、蛋白 - 小分子以及受体 - 配体相互作用。均相时间分辨荧光技术（HTRF）可检测的亲和力常数范围宽泛，涵盖皮摩尔至低毫摩尔级别。

检测原理

在 HTRF 互作检测实验中，一对互作分子中的一方会被直接或间接标记供体基团，另一方则被直接或间接标记受体基团。信号强度与两个分子的结合程度呈正相关。本产品的应用示例如下：抗 GST-d2 单克隆抗体与带 GST 标签的互作分子 A 结合，互作分子 B * 则与标记有 HTRF 供体基团的特异性抗体结合。* 注：互作分子 B 也可进行生物素化、加标签、Fc 融合等修饰处理。针对这些情况，可使用相应的标记有供体基团的 HTRF 试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）开展检测。

检测方案

右侧示例阐述了终反应体积为 20 微升时，检测带 GST 标签的互作分子 A 与无标签互作分子 B * 之间相互作用的实验方案：加入两种互作分子（10 微升）并孵育，随后加入抗 GST-d2 单克隆抗体（5 微升）及标记有供体基团的抗互作分子 B 抗体（5 微升），再次孵育后进行读数检测。* 注：互作分子 B 也可进行生物素化、加标签、Fc 融合或直接标记等修饰处理。针对这些情况，可使用相应的标记有供体基团的 HTRF 试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）开展检测。

检测详情

为特定应用需求构建专属 HTRF 互作检测体系试剂按检测次数（20 微升反应体系 / 次）进行销售。标记有 XL665 或 d2 的抗体，按每孔 20 纳克抗体的标准提供。每瓶试剂还会标注活性成分含量（以及每瓶示踪剂数量，详见产品说明书）。活性成分指的是缀合物中具有活性的部分（例如抗体）。

检测次数与活性成分的关联

每孔缀合物的平均用量反映了生物材料的总含量。相较于总缀合物用量，通常优先参考活性成分用量。对于穴状化合物（Cryptate）和 d2 标记的缀合物，由于标记物的分子量可忽略不计，总缀合物用量与活性成分用量相等。但 XL665 标记物的情况有所不同，其总缀合物用量会随 XL665 缀合摩尔比的最终数值变化而改变，不过瑞孚迪（Revvity）所提供的试剂中，活性成分含量是固定的，且与订购的检测次数相对应。

穴状化合物与 XL665 缀合物的推荐用量

穴状化合物缀合物的用量不可过量，以防造成读板仪信号饱和，并产生难以接受的高背景信号。在大多数情况下，1–5 纳摩尔的穴状化合物浓度较为适宜，根据所使用的 HTRF 兼容读板仪的不同，在 620 纳米波长下可产生 20,000–80,000 计数 / 秒的信号强度。XL665 缀合物的用量需尽可能与检测体系中的对应靶标浓度相匹配，以实现 XL665 受体基团对生物分子的最大化标记。因此，若检测体系中带标签分子的浓度为 20 纳摩尔，抗标签 - XL665 缀合物的浓度应达到等摩尔或更高水平。

产品规格

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用检测
• 品牌：均相时间分辨荧光技术（HTRF）
• 检测方法：均相时间分辨荧光技术（HTRF）
• 产品类别：荧光试剂
• 运输条件：常温运输
• 检测类型：结合分析
• 技术平台：时间分辨荧光共振能量转移技术（TR-FRET）
• 适用治疗领域：心血管疾病、感染性疾病、炎症、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病
• 产品规格：5000 个检测点