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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > HTRF MAB ANTI MBP-EU - 20K PTS

概述


抗麦芽糖结合蛋白 - 铕穴状化合物单克隆抗体为 IgG1 型抗体,以经铕标记的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合蛋白纯化重组体为抗原制备所得,可识别天然形式及变性还原形式的纯化麦芽糖结合蛋白或麦芽糖结合蛋白融合蛋白。


本试剂可应用于生化和细胞实验体系,适用于研究多种相互作用类型,包括蛋白 - 蛋白、蛋白 - 多肽、蛋白 - DNA、蛋白 - RNA、蛋白 - 碳水化合物、蛋白 - 小分子、受体 - 配体相互作用。


均相时间分辨荧光技术(HTRF)可检测的亲和常数范围极广,覆盖皮摩尔级至低毫摩尔级。


相较于其他技术,均相时间分辨荧光检测法具备多项优势:
  • 均相加样即读模式

  • 无需洗涤步骤

  • 背景信号低

  • 可便捷地从 96 孔 / 384 孔微孔板微型化至高密度检测板,如 384 孔低体积板、1536 孔板

  • 检测信号稳定,检测时间与检测规模的选择更具灵活性

工作原理

检测原理

在均相时间分辨荧光相互作用检测实验中,一结合配体由供体直接或间接标记,另一结合配体由受体直接或间接标记,信号强度与两种配体的结合程度呈正相关。本产品的检测示例如下:抗麦芽糖结合蛋白 - 铕穴状化合物单克隆抗体与带麦芽糖结合蛋白标签的配体 A 结合,而配体 B * 与经均相时间分辨荧光受体标记的特异性抗体结合。* 配体 B 也可进行生物素化、标签化或 Fc 融合改造,此类情况下,需使用经受体标记的对应均相时间分辨荧光试剂(抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素)完成检测。

均相时间分辨荧光抗麦芽糖结合蛋白 - 铕穴状化合物单克隆抗体示意图 1

HTRF MAb Anti MBP-Eu cryptate 1.svg

检测操作流程

右侧示例为终体积 20 微升的检测操作流程,适用于检测带麦芽糖结合蛋白标签的配体 A 与无标签配体 B * 的相互作用。操作步骤:加入两种配体(10 微升)→孵育→加入抗麦芽糖结合蛋白 - 铕穴状化合物单克隆抗体(5 微升)及经受体标记的抗配体 B 抗体(5 微升)→孵育→读数检测。* 配体 B 也可进行生物素化、标签化、Fc 融合改造或直接标记,此类情况下,需使用经受体标记的对应均相时间分辨荧光试剂(抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素)完成检测。

均相时间分辨荧光抗麦芽糖结合蛋白 - 铕穴状化合物单克隆抗体示意图 2

HTRF MAb Anti MBP-Eu cryptate 2.svg

检测细节

检测次数与活性成分的关联

每孔偶联物的平均用量反映生物原料的总含量,实验中通常优先采用活性成分的用量,而非偶联物的总用量。对于穴状化合物偶联物和 d2 偶联物,由于标记物的分子量可忽略不计,偶联物总用量与活性成分用量相等;但 XL665 标记物并非如此,其偶联物总用量会随 XL665 偶联物的最终摩尔比发生变化,而瑞孚迪(Revvity)提供的活性成分用量为定值,且与订购的检测次数相匹配。

均相时间分辨荧光抗麦芽糖结合蛋白 - d2 示意图 3

HTRF MAb Anti MBP-d2 3.svg

穴状化合物偶联物与 XL665 偶联物的推荐用量

为避免检测仪器信号饱和及背景信号过高,穴状化合物偶联物的用量不得过量。多数实验中,1~5 纳摩尔的穴状化合物浓度为适宜浓度,配合兼容的均相时间分辨荧光检测仪使用时,在 620 纳米波长下可产生 20000~80000 次 / 秒的荧光计数信号(cps)。为使尽可能多的生物分子被 XL665 受体标记,XL665 偶联物的用量需与检测体系中的对应配体用量尽可能匹配。因此,若检测体系中带标签分子的浓度为 20 纳摩尔,抗标签 - XL665 的浓度应达到等摩尔或更高。


产品规格


其他规格信息

  • 应用领域:蛋白 - 蛋白相互作用研究

  • 品牌:均相时间分辨荧光技术(HTRF)

  • 检测方式:均相时间分辨荧光法(HTRF)

  • 产品类别:荧光试剂

  • 运输条件:干冰运输

  • 检测类型:结合实验

  • 核心技术:时间分辨荧光共振能量转移技术(TR-FRET)

  • 适用治疗领域:心血管疾病、感染性疾病、炎症性疾病、代谢性疾病 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病

  • 产品规格:20000 次检测量


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