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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > HTRF MAB ANTI MBP-TB - 5K PTS MBP Tb测量试剂-5,000测试

概述


抗麦芽糖结合蛋白 - 铽穴状化合物单克隆抗体为免疫球蛋白 G1 型抗体,以经纯化、并标记铽(Tb)的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合蛋白重组体为抗原制备而成。该抗体可识别天然形式的纯化麦芽糖结合蛋白 / 麦芽糖结合蛋白融合蛋白,也可识别经变性还原处理后的上述蛋白。


本试剂可应用于生化和细胞实验体系,适用于研究多种分子间相互作用,包括:蛋白 - 蛋白、蛋白 - 多肽、蛋白 - DNA、蛋白 - RNA、蛋白 - 碳水化合物、蛋白 - 小分子、受体 - 配体相互作用。


均相时间分辨荧光技术(HTRF)可检测的亲和常数范围极广,从皮摩尔级别至低毫摩尔级别均可覆盖。


相较于其他技术,均相时间分辨荧光检测法具备多项优势:

均相体系,加样后直接读数即可完成检测

无需洗涤步骤

背景信号低

可便捷地实现微量化,从 96 孔 / 384 孔微孔板轻松适配 384 孔低体积板、1536 孔板等高密板检测体系

检测信号稳定,可为读数时间选择、检测体系规模设计提供灵活度


工作原理

检测原理

在均相时间分辨荧光相互作用检测实验中,将供体标记物(直接或间接)标记至其中一种作用分子,另一种作用分子则标记受体标记物(同样为直接或间接标记)。检测信号的强度与两种分子的结合程度呈正相关。本产品的检测示例如下:抗麦芽糖结合蛋白 - 铽穴状化合物单克隆抗体与带麦芽糖结合蛋白标签的作用分子 A 结合,同时作用分子 B * 与经均相时间分辨荧光受体标记物标记的特异性抗体结合。* 作用分子 B 也可进行生物素化、加标签、Fc 段融合改造,此类情况下,可使用经受体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂(抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素)完成检测。

抗麦芽糖结合蛋白 - 铽穴状化合物均相时间分辨荧光单克隆抗体示意图 1

HTRF MAb Anti MBP-Tb cryptate 1.svg

检测操作流程

右侧示例为终体积 20 微升的检测操作流程,适用于检测带麦芽糖结合蛋白标签的作用分子 A 与无标签的作用分子 B * 之间的相互作用。操作步骤:加入两种作用分子(各 10 微升),孵育;加入抗麦芽糖结合蛋白 - 铽穴状化合物单克隆抗体(5 微升)及经受体标记物标记的抗作用分子 B 抗体(5 微升),孵育后读取检测信号。* 作用分子 B 也可进行生物素化、加标签、Fc 段融合改造或直接标记,此类情况下,可使用经受体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂(抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素)完成检测。

抗麦芽糖结合蛋白 - 铽穴状化合物均相时间分辨荧光单克隆抗体示意图 2

HTRF MAb Anti MBP-Tb cryptate 2.svg

检测细节

检测次数与活性成分含量的关联

每孔标记物的平均用量反映了整体生物原料的含量,通常优先采用活性成分的用量作为计量依据,而非标记物的总用量。对于穴状化合物标记物和 d2 标记物,由于标记基团的分子量可忽略不计,因此标记物总用量与活性成分用量相等。但 XL665 标记物并非如此,其总用量会随 XL665 标记物的最终摩尔比发生变化;而瑞孚迪(Revvity)提供的 XL665 标记物,其活性成分用量为固定值,且该数值基于订购的检测次数确定。

麦芽糖结合蛋白 - d2 均相时间分辨荧光单克隆抗体示意图 3

HTRF MAb Anti MBP-d2 3.svg

穴状化合物标记物与 XL665 标记物的推荐用量

为避免检测仪器信号饱和及背景信号过高,穴状化合物标记物的用量不得过量。多数情况下,穴状化合物标记物的浓度为 1-5 纳摩尔每升为宜,结合适配的均相时间分辨荧光检测仪,在 620 纳米波长下可产生 20000-80000 次 / 秒的计数信号。为使尽可能多的生物分子被 XL665 受体标记物标记,XL665 标记物的用量需与检测体系中的对应分子用量尽可能匹配。因此,若检测体系中带标签分子的浓度为 20 纳摩尔每升,抗标签 - XL665 标记物的浓度应达到等摩尔及以上。


产品规格


其他规格信息

  • 应用领域:蛋白 - 蛋白相互作用研究

  • 品牌:均相时间分辨荧光技术(HTRF)

  • 检测方式:均相时间分辨荧光检测(HTRF)

  • 产品类别:荧光试剂

  • 运输条件:干冰运输

  • 检测类型:结合实验

  • 核心技术:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)

  • 适用治疗领域:心血管疾病、感染性疾病、炎症性疾病、代谢性疾病 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病

  • 产品规格:5000 次检测量


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