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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > HTRF MAB ANTI MBP-TB - 20K PTS

概述


抗麦芽糖结合蛋白 - 铽穴状化合物单克隆抗体为免疫球蛋白 G1 型抗体,以经纯化、且标记铽(Tb)的麦芽糖结合蛋白(MBP)融合蛋白重组体为抗原制备所得。该抗体可识别天然形式的纯化麦芽糖结合蛋白及麦芽糖结合蛋白融合蛋白,亦可识别经变性还原处理后的上述蛋白。


本试剂可应用于生化与细胞实验体系,适用于研究多种分子间相互作用,包括:蛋白 - 蛋白、蛋白 - 多肽、蛋白 - DNA、蛋白 - RNA、蛋白 - 碳水化合物、蛋白 - 小分子、受体 - 配体相互作用。


均相时间分辨荧光技术(HTRF)可检测的亲和常数范围极广,覆盖皮摩尔至低毫摩尔级别。


相较于其他技术,均相时间分辨荧光检测法具备多项优势:
  • 均相加样即读体系,操作简便

  • 无需洗涤步骤

  • 背景信号低

  • 可便捷实现微量化适配,从 96 孔 / 384 孔微孔板轻松转换至 384 孔低体积板、1536 孔板等高密板检测体系

  • 检测信号稳定,为读数时间选择、检测体系规模设计提供灵活度

工作原理

检测原理

在均相时间分辨荧光相互作用检测实验中,将供体标记物直接或间接标记于其中一种作用分子,另一种作用分子则直接或间接标记受体标记物。检测信号的强度与两种分子的结合程度呈正相关。本产品的检测示例如下:抗麦芽糖结合蛋白 - 铽穴状化合物单克隆抗体与带麦芽糖结合蛋白标签的作用分子 A 结合,同时作用分子 B * 与经均相时间分辨荧光受体标记物标记的特异性抗体相结合。* 作用分子 B 也可进行生物素化、加标签、Fc 段融合改造,此类情况下,可使用经受体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂(抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素)完成检测。

均相时间分辨荧光抗麦芽糖结合蛋白 - 铽穴状化合物单克隆抗体示意图 1

HTRF MAb Anti MBP-Tb cryptate 1.svg

检测操作流程

右侧示例为终体积 20 微升的检测操作流程,适用于检测带麦芽糖结合蛋白标签的作用分子 A 与无标签的作用分子 B * 之间的相互作用。操作步骤:加入两种作用分子(共 10 微升),孵育;加入抗麦芽糖结合蛋白 - 铽穴状化合物单克隆抗体(5 微升)及经受体标记物标记的抗作用分子 B 抗体(5 微升),孵育后读取检测信号。* 作用分子 B 也可进行生物素化、加标签、Fc 段融合改造或直接标记,此类情况下,可使用经受体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂(抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素)完成检测。

均相时间分辨荧光抗麦芽糖结合蛋白 - 铽穴状化合物单克隆抗体示意图 2

HTRF MAb Anti MBP-Tb cryptate 2.svg

检测细节

检测次数与活性成分含量的关联

每孔标记结合物的平均用量反映整体生物原料的含量,通常优先采用活性成分用量作为计量依据,而非标记结合物的总用量。对于穴状化合物标记结合物和 d2 标记结合物,因标记基团的分子量可忽略不计,标记结合物的总用量与活性成分用量相等。XL665 标记物则并非如此,其标记结合物的总用量会随 XL665 标记结合物的最终摩尔比发生变化;但瑞孚迪(Revvity)提供的该类标记物,其活性成分用量为固定值,且该数值依据订购的检测次数确定。

均相时间分辨荧光抗麦芽糖结合蛋白 - d2 单克隆抗体示意图 3

HTRF MAb Anti MBP-d2 3.svg

穴状化合物标记结合物与 XL665 标记结合物的推荐用量

为避免检测仪器信号饱和及背景信号过高,穴状化合物标记结合物的用量不得过量。多数实验场景下,穴状化合物标记结合物的适宜浓度为 1-5 纳摩尔 / 升,搭配适配的均相时间分辨荧光检测仪,在 620 纳米波长下可产生 20000-80000 次 / 秒的计数信号。

为使尽可能多的生物分子被 XL665 受体标记物标记,XL665 标记结合物的用量需与检测体系中的对应分子用量尽可能匹配。因此,若检测体系中带标签分子的浓度为 20 纳摩尔 / 升,抗标签 - XL665 标记结合物的浓度应达到等摩尔及以上。


产品规格


其他规格信息

  • 应用领域:蛋白 - 蛋白相互作用研究

  • 品牌:均相时间分辨荧光技术(HTRF)

  • 检测方式:均相时间分辨荧光检测(HTRF)

  • 产品类别:荧光试剂

  • 运输条件:干冰运输

  • 检测类型:结合实验

  • 核心技术:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)

  • 适用治疗领域:心血管疾病、感染性疾病、炎症性疾病、代谢性疾病 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病

  • 产品规格:20000 次检测量

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