概述

抗 c-myc - 铽单克隆抗体为免疫球蛋白 G1 型抗体，以经铽（Tb）标记、对应人源 c-myc 蛋白 408-439 位氨基酸序列的合成肽为抗原制备而成。该抗体可识别 EQKLISEEDL 基序，对人源 c-myc 蛋白具有特异性；仅在抗体高浓度条件下，观察到其与鼠源 c-myc 蛋白存在轻微交叉反应。

本试剂可应用于生化和细胞实验体系，适用于研究多种分子间相互作用，包括蛋白 - 蛋白、蛋白 - 多肽、蛋白 - DNA、受体 - 配体相互作用。

均相时间分辨荧光技术（HTRF）可检测的亲和常数范围极广，覆盖皮摩尔至低毫摩尔级别。

• 均相加样即读检测体系

• 无需洗涤步骤

• 背景信号低

• 可从 96 孔 / 384 孔微孔板便捷适配至 384 孔低体积板、1536 孔板等高密板检测体系

• 检测信号稳定，为读数时间选择、检测体系规模设计提供灵活度

工作原理

检测原理

在均相时间分辨荧光相互作用检测实验中，将供体标记物直接或间接标记于其中一种作用分子，另一种作用分子则直接或间接标记受体标记物，检测信号的强度与两种分子的结合程度呈正相关。本产品的检测示例如下：抗 c-myc - 铕穴状化合物单克隆抗体与带 c-myc 标签的作用分子 A 结合，同时作用分子 B * 与经均相时间分辨荧光受体标记物标记的特异性抗体相结合。* 作用分子 B 也可进行生物素化、加标签或 Fc 段融合改造，此类情况下，可使用经受体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）完成检测。

均相时间分辨荧光抗 c-myc - 铽穴状化合物单克隆抗体示意图 1

检测操作流程

右侧示例为终体积 20 微升的检测操作流程，适用于检测带 c-myc 标签的作用分子 A 与无标签的作用分子 B * 之间的相互作用。操作步骤：加入两种作用分子（10 微升）并孵育，加入抗 c-myc - 铕穴状化合物单克隆抗体（5 微升）及经受体标记物标记的抗作用分子 B 抗体（5 微升），孵育后读取检测信号。* 作用分子 B 也可进行生物素化、加标签、Fc 段融合改造或直接标记，此类情况下，可使用经受体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）完成检测。

均相时间分辨荧光抗 c-myc - 铽穴状化合物单克隆抗体示意图 2

检测细节

检测次数与活性成分的关联

每孔标记偶联物的平均用量反映整体生物原料的含量，实验中通常优先采用活性成分的用量作为计量依据，而非标记偶联物的总用量。对于穴状化合物标记偶联物和 d2 标记偶联物，因标记基团的分子量可忽略不计，标记偶联物的总用量与活性成分用量相等。XL665 标记偶联物则并非如此，其总用量会随 XL665 标记偶联物的最终摩尔比发生变化；但瑞孚迪（Revvity）提供的该类标记物，其活性成分用量为固定值，且该数值依据订购的检测次数确定。

均相时间分辨荧光抗 c-myc-d2 单克隆抗体示意图 3

穴状化合物标记偶联物与 XL665 标记偶联物的推荐用量

为避免检测仪器信号饱和及背景信号过高，穴状化合物标记偶联物的用量不得过量。多数实验场景下，穴状化合物标记偶联物的适宜浓度为 1-5 纳摩尔 / 升，搭配适配的均相时间分辨荧光检测仪，在 620 纳米波长下可产生 20000-80000 次 / 秒的计数信号。为使尽可能多的生物分子被 XL665 受体标记物标记，XL665 标记偶联物的用量需与检测体系中的对应分子用量尽可能匹配。因此，若检测体系中带标签分子的浓度为 20 纳摩尔 / 升，抗标签 - XL665 标记偶联物的浓度应达到等摩尔及以上。

检测验证

绿色荧光蛋白 - c-Myc 融合蛋白检测 —— 检测原理

铽穴状化合物标记偶联物可与 XL665、d2 等均相时间分辨荧光受体标记物兼容，也可与荧光素、绿色荧光蛋白（GFP）兼容，这意味着检测体系的设计灵活性可得到大幅提升。本实验以经铽标记的均相时间分辨荧光抗 c-myc 抗体检测绿色荧光蛋白 - c-Myc 融合肽，结果显示，仅在表达绿色荧光蛋白 - c-Myc 融合蛋白的细胞中可检测到特异性信号。该组合为利用绿色荧光蛋白这类编码型兼容荧光团，开发均相时间分辨荧光细胞检测实验开辟了新方向。

均相时间分辨荧光抗 c-myc - 铽穴状化合物单克隆抗体示意图 3

绿色荧光蛋白 - c-Myc 融合蛋白检测 —— 实验结果

本实验为绿色荧光蛋白 - c-Myc 融合蛋白的均相时间分辨荧光检测实验。将活细胞接种至 384 孔板，瞬时转染编码绿色荧光蛋白 - c-Myc 融合肽的质粒；在 37℃条件下孵育 24 小时后，加入含抗 c-myc - 铽抗体的裂解缓冲液，于室温继续孵育 1 小时，随后在 PHERAstar 多功能检测仪上读取信号。对比转染绿色荧光蛋白 - c-Myc 质粒的细胞与转染空载体的细胞，前者的信号背景比大于 3。

均相时间分辨荧光抗 c-myc - 铽穴状化合物单克隆抗体示意图 4

产品规格

其他规格信息

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用研究

• 品牌：HTRF

• 检测方式：均相时间分辨荧光检测（HTRF）

• 产品类别：荧光试剂

• 运输条件：干冰运输

• 检测类型：结合实验

• 适用物种：人

• 核心技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）

• 适用治疗领域：心血管疾病、感染性疾病、炎症性疾病、代谢性疾病 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病

• 产品规格：20000 次检测量