概述

蛋白 A 经铕离子（Eu³⁺）穴状化合物标记制得。蛋白 A - 铕穴状化合物可用于检测免疫球蛋白的结合作用，对多种哺乳动物的免疫球蛋白 G（IgG）检测效果尤为显著。

本试剂可应用于生化和细胞实验体系，适用于研究各类分子间相互作用，包括蛋白 - 蛋白、蛋白 - 多肽、蛋白 - DNA、蛋白 - RNA、蛋白 - 碳水化合物、蛋白 - 小分子、受体 - 配体相互作用。

均相时间分辨荧光技术（HTRF）可检测的亲和常数范围极广，覆盖皮摩尔至低毫摩尔级别。

• 均相加样即读体系

• 无需洗涤步骤

• 背景信号低

• 可从 96 孔 / 384 孔微孔板便捷适配至 384 孔低体积板、1536 孔板等高密板检测体系

• 检测信号稳定，为读数时间选择、检测体系规模设计提供灵活度

工作原理

检测原理

在均相时间分辨荧光相互作用检测实验中，将供体标记物直接或间接标记于其中一种作用分子，另一种作用分子则直接或间接标记受体标记物，检测信号的强度与两种分子的结合程度呈正相关。本产品的检测示例如下：蛋白 A - 铕穴状化合物与 Fc 段融合标签化的作用分子 A 结合，同时作用分子 B * 与经均相时间分辨荧光受体标记物标记的特异性抗体相结合。* 作用分子 B 也可进行生物素化、加标签或 Fc 段融合改造，此类情况下，可使用经受体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）完成检测。

均相时间分辨荧光 蛋白 A - 铕穴状化合物 示意图 1

检测操作流程

右侧示例为终体积 20 微升的检测操作流程，适用于检测 Fc 段融合标签化的作用分子 A 与无标签的作用分子 B * 之间的相互作用。加入两种作用分子（10 微升）并孵育，加入蛋白 A - 铕穴状化合物（5 微升）及经受体标记物标记的抗作用分子 B 抗体（5 微升），孵育后读取检测信号。* 作用分子 B 也可进行生物素化、加标签、Fc 段融合改造或直接标记，此类情况下，可使用经受体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）完成检测。

均相时间分辨荧光 蛋白 A - 铕穴状化合物 示意图 2

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检测细节

检测次数与活性成分的关联

每孔标记偶联物的平均用量反映整体生物原料的含量，实验中通常优先采用活性成分的用量作为计量依据，而非标记偶联物的总用量。对于穴状化合物标记偶联物和 d2 标记偶联物，因标记基团的分子量可忽略不计，标记偶联物的总用量与活性成分用量相等。XL665 标记偶联物则并非如此，其总用量会随 XL665 标记偶联物的最终摩尔比发生变化；但瑞孚迪（Revvity）提供的该类标记物，其活性成分用量为固定值，且该数值依据订购的检测次数确定。

均相时间分辨荧光 蛋白 A-XL665 示意图 3

穴状化合物标记偶联物与 XL665 标记偶联物的推荐用量

产品规格

其他规格信息

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用研究

• 品牌：HTRF

• 检测方式：均相时间分辨荧光检测（HTRF）

• 产品类别：荧光试剂

• 运输条件：常温运输

• 检测类型：结合实验

• 核心技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）

• 适用治疗领域：心血管疾病、感染性疾病、炎症性疾病、代谢性疾病 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病

• 产品规格：5000 次检测量