概述

蛋白 A 经 XL665 荧光染料标记制得。该蛋白 A-XL665 标记物可用于检测免疫球蛋白的结合作用，对多种哺乳动物的免疫球蛋白 G（IgG）检测效果尤为显著。

本试剂可应用于生化和细胞实验体系，适用于研究各类分子间相互作用，包括蛋白 - 蛋白、蛋白 - 多肽、蛋白 - 脱氧核糖核酸、蛋白 - 核糖核酸、蛋白 - 碳水化合物、蛋白 - 小分子、受体 - 配体相互作用。

均相时间分辨荧光技术（HTRF）可检测的亲和常数范围极广，覆盖皮摩尔至低毫摩尔级别。

• 均相加样即读检测模式

• 无需洗涤步骤

• 背景信号低

• 可从 96 孔 / 384 孔微孔板便捷适配至 384 孔低体积板、1536 孔板等高密板检测体系

• 检测信号稳定，为检测读数时间选择和检测体系规模设计提供灵活度

作用原理

检测原理

在均相时间分辨荧光相互作用检测实验中，将供体标记物直接或间接标记于其中一种作用分子，另一种作用分子则直接或间接标记受体标记物，检测信号的强度与两种分子的结合程度呈正相关。本产品的检测示例如下：蛋白 A-XL665 与 Fc 段融合标签化的作用分子 A 相结合，同时作用分子 B * 与经均相时间分辨荧光供体标记物标记的特异性抗体相结合。* 若作用分子 B 经过生物素化、加标签或 Fc 段融合改造，可使用经供体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）完成检测。

均相时间分辨荧光 蛋白 A-XL665 示意图 1

检测操作流程

下述为终体积 20 微升的检测操作流程示例，适用于检测 Fc 段融合标签化的作用分子 A 与无标签的作用分子 B * 之间的相互作用。加入 10 微升两种作用分子并孵育，随后加入 5 微升蛋白 A-XL665 和 5 微升经供体标记物标记的抗作用分子 B 抗体，孵育完成后读取检测信号。* 若作用分子 B 经过生物素化、加标签、Fc 段融合改造或直接标记，可使用经供体标记物标记的对应均相时间分辨荧光试剂（抗标签抗体、抗种属抗体、蛋白 A、链霉亲和素）完成检测。

均相时间分辨荧光 蛋白 A-XL665 示意图 2

检测细节

为特定应用构建均相时间分辨荧光相互作用检测体系

本系列试剂按检测次数（20 微升反应体系 / 次）销售。偶联 XL665 或 d2 的标记物产品，按每孔 20 纳克抗体的标准供货。产品同时提供每瓶试剂中的活性成分含量（及每瓶示踪剂数量，详见产品说明书），活性成分指标记偶联物中具有生物活性的部分（如抗体）。

检测次数与活性成分的关联

每孔标记偶联物的平均用量反映整体生物原料的含量，实验中通常优先采用活性成分的用量作为计量依据，而非标记偶联物的总用量。对于穴状化合物标记偶联物和 d2 标记偶联物，因标记基团的分子量可忽略不计，标记偶联物的总用量与活性成分用量相等。XL665 标记偶联物则不同，其总用量会随 XL665 标记偶联物的最终摩尔比发生变化；但瑞孚迪（Revvity）提供的该类标记物，其活性成分用量为固定值，且该数值根据订购的检测次数确定。蛋白 A 活性成分参考用量（5000 次检测）：铕标记偶联物 3.5 微克，XL665 标记偶联物 50 微克。

均相时间分辨荧光 蛋白 A-XL665 示意图 3

穴状化合物标记偶联物与 XL665 标记偶联物的推荐用量

为避免检测仪器信号饱和及背景信号过高，穴状化合物标记偶联物的用量不得过量。多数实验场景下，穴状化合物标记偶联物的适宜浓度为 1-5 纳摩尔 / 升，搭配适配的均相时间分辨荧光检测仪，在 620 纳米波长下可产生 20000 至 80000 次 / 秒的计数信号。为使尽可能多的生物分子被 XL665 受体标记物标记，XL665 标记偶联物的用量需与检测体系中的对应分子用量尽可能匹配。因此，若检测体系中带标签分子的浓度为 20 纳摩尔 / 升，抗标签 - XL665 标记偶联物的浓度应达到等摩尔及以上。

产品规格

其他规格信息

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用研究

• 品牌：HTRF

• 检测方法：均相时间分辨荧光检测（HTRF）

• 产品类别：荧光试剂

• 运输条件：常温运输

• 检测类型：结合实验核心技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）

• 适用研究领域：心血管疾病、感染性疾病、炎症性疾病、代谢性疾病 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤与炎症、罕见病检测

• 规格：20000 次检测量