概述

泛素化在蛋白质降解调控中发挥关键作用，该过程通过泛素在 E1、E2、E3 三种酶的依次催化下与靶蛋白结合实现，经多聚泛素化修饰的蛋白质随后会被蛋白酶体降解。

泛素通路与癌症、肌肉萎缩、炎症、病毒感染，以及代谢性疾病和神经退行性疾病等多种病症相关。铕穴状化合物标记泛素试剂可支持灵活的检测方法开发，实现对泛素通路各反应步骤的检测分析。

• 均相加样即读模式

• 无需洗涤步骤

• 背景信号低

• 可从 96 孔 / 384 孔微孔板便捷适配至 384 孔低体积板、1536 孔板等高密板检测体系

• 检测信号稳定，为读数时间选择和检测体系规模设计提供灵活度

检测原理

均相时间分辨荧光泛素检测采用铕穴状化合物标记的泛素作为核心试剂，加入 XL665 标记偶联物后，检测信号强度与蛋白泛素化水平呈正相关，且信号稳定性可保持 24 小时以上。本文以 p53 蛋白多聚泛素化检测为例进行说明。

检测操作流程

1. 酶促反应阶段：将靶蛋白与泛素化相关酶（E2、E3）、铕离子标记泛素共同孵育，加入 E1 酶启动反应。
2. 检测阶段：加入含乙二胺四乙酸的 XL665 标记试剂，终止酶促反应的同时完成对泛素化靶蛋白的检测。

检测验证

p53 蛋白多聚泛素化检测

下面图表总结了 p53 蛋白多聚泛素化检测的实验结果。

实验结果显示，酶促反应在 50 分钟内呈线性变化；该检测方法的变异系数低于 5%，信号背景比达 10，且信号稳定性可维持数天。

* 本泛素化检测实验参照薮木等人发表于《组合化学与高通量筛选》1999 年 10 月第 2 卷第 5 期 279-287 页的方法进行。

产品规格

其他技术参数

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用研究

• 品牌：HTRF

• 检测方法：HTRF（均相时间分辨荧光检测）

• 产品类别：荧光试剂

• 运输条件：常温运输

• 检测类型：结合实验

• 核心技术：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）检测

• 规格：20000 次检测量