概述

β- 分泌酶（BACE1）是一种能切割淀粉样前体蛋白（APP）的酶，其切割产物为淀粉样 β42 肽，该多肽是导致阿尔茨海默病（AD）患者脑中形成不溶性淀粉样斑块的关键物质。

经生物素与铕离子穴状化合物双标记的 HTRF 淀粉样前体蛋白（APP）底物，搭配 HTRF 链霉亲和素 - XL665（SA-XL665）或链霉亲和素 - d2（SA-d2）使用，依托 HTRF 技术的高可靠性，为筛选 β- 分泌酶（BACE1）抑制剂提供了灵敏、高效的检测方法。

• 均相加样即读模式

• 无需洗涤步骤

• 背景信号低

• 可从 96 孔 / 384 孔微孔板便捷适配至 384 孔低体积板、1536 孔板等高密板检测体系

• 检测信号稳定，为读数时间选择和检测体系规模设计提供灵活度

检测原理

HTRF β- 分泌酶（BACE1）检测法以经生物素和铕离子穴状化合物双标记的淀粉样前体蛋白（APP）为底物。具有活性的 β- 分泌酶（BACE1）会对该底物进行切割，造成能量转移过程中断，进而使链霉亲和素 - XL665 或链霉亲和素 - d2 的荧光发射信号降低。

检测操作流程

本检测采用两步法进行：

1. β- 分泌酶（BACE1）酶促反应：将 APP 底物、BACE1 酶和 / 或待测化合物混合后孵育（建议开展时间梯度实验，确定最佳孵育时间）；

2. β- 分泌酶（BACE1）活性检测：加入链霉亲和素 - XL665 或链霉亲和素 - d2 完成检测。

检测验证

β- 分泌酶（BACE1）多肽类抑制剂的活性评价

本研究利用 HTRF β- 分泌酶（BACE1）检测法，对比了可溶性前体型 β- 分泌酶（sproBACE1）与经自身加工去除前体结构域的可溶性 β- 分泌酶（sautoBACE1）在特定抑制剂作用下的酶活性。在添加及梯度升高多肽类抑制剂浓度的条件下，将 25 纳摩尔 / 升的生物素 - APP 底物 - 铕穴状化合物、5 微摩尔 / 升的未标记 APP 肽底物与 6 纳摩尔 / 升的目标酶，在 pH 5.0、30℃条件下共同孵育 3 小时。

本实验测得的半数抑制浓度（IC50）数据见下表，与文献中通过动力学检测法所得结果高度一致（参考文献：肯尼迪・M・E 等，《分析生物化学》，2003 年 8 月 1 日；319 (1)：49-55）。可溶性前体型 β- 分泌酶（■）、经自身加工的可溶性 β- 分泌酶（○）；抑制剂 KTEEISEVNL - 抑肽氨酸 - VAEF（------）、EVNL (GHET) AAEF（——）、ELDL (GHET) AVEF（——）

产品规格

其他技术参数

• 应用领域：蛋白定量

• 品牌：HTRF

• 检测方法：HTRF（均相时间分辨荧光检测）

• 产品类别：荧光试剂

• 运输条件：干冰运输

• 检测靶点类别：生物标志物

• 检测物种：人类

• 核心技术：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）

• 检测规格：20000 次检测量