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HTRF EGFR P-Y1068 KIT - 500 PTS 磷酸化EGFR(Y1068)检测试剂盒 - 500测试

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概述

磷酸化 EGFR 检测试剂盒旨在基于细胞对 EGFR 上的 Tyr1068 磷酸化进行定量检测。导致 EGFR（也称为 ErbB1 或 HER1）过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，如肺癌、结直肠癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤等。这使得 EGFR 成为抗癌治疗相关免疫检测的关键靶点。

工作原理

磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测原理

磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测用于测定在 Tyr1068 位点发生磷酸化的 EGFR。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且在免洗涤的检测形式下为评估蛋白质的磷酸化状态提供了方法。

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磷酸化 EGFR（Tyr1068）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化 EGFR（Tyr1068）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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磷酸化 EGFR（Tyr1068）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 EGFR（Tyr1068）可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中完成，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

HTRF 磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测与蛋白质印迹法（WB）的比较

将人 A431 细胞培养 48 小时，用 100 ng/mL EGF 刺激 10 分钟。裂解后，通过离心收集可溶性组分。用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 进行平行分析。使用 HTRF 磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测时，仅需 100 个细胞即可检测到最低信号，而蛋白质印迹法需要 3120 个细胞才能产生信号。HTRF 磷酸化 EGFR 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 30 倍，且相关性良好。

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