概述

本试剂盒为筛选野生型脑啡肽素（CRBN）新型结合物提供了一种快速、简便的方法。

脑啡肽素（又称 CRBN）参与多种生物学过程，与细胞增殖、凋亡、代谢及多种疾病的发生发展密切相关。同时，它也是双功能蛋白降解靶向嵌合体（PROTAC）招募的两种最常见 E3 泛素连接酶之一，可介导靶蛋白的泛素化修饰及后续的蛋白酶体降解。脑啡肽素可与多种蛋白结合形成功能性 E3 泛素连接酶复合物，在该复合物中，CRBN 作为底物识别亚基发挥作用，介导靶蛋白的蛋白酶体降解。

因此，筛选脑啡肽素新型配体，可通过诱导靶蛋白的蛋白酶体依赖性降解，实现对肿瘤、神经退行性疾病或代谢性疾病相关生物学过程的调控。

工作原理

检测原理

HTRF 脑啡肽素结合检测为竞争法检测体系，实验中使用沙利度胺 - 红色荧光探针作为脑啡肽素配体、带 GST 标签的人源脑啡肽素蛋白，以及抗 GST 穴状化合物标记抗体。待测化合物会与沙利度胺 - 红色荧光探针竞争结合脑啡肽素，进而抑制荧光共振能量转移（FRET）的发生。

检测操作流程

检测验证

脑啡肽素正构配体的筛选验证

向检测体系中加入多种已知的脑啡肽素配体，来那度胺（检测标准品）、泊马度胺和沙利度胺均表现出符合文献报道的活性强度与药理排名。VH032（已知的 VHL E3 泛素连接酶正构配体）与 Nutlin3a（已知的 MDM2 E3 泛素连接酶正构配体）这两种非特异性化合物，对本检测体系无任何作用，证实了本试剂盒对脑啡肽素结合物检测的特异性。

基于脑啡肽素配体的 PROTAC 化合物筛选验证

二甲基亚砜（DMSO）对检测性能的影响

实验检测了终浓度 0.4% 至 2% 的 DMSO 对检测体系的影响，结果显示：随着 DMSO 浓度升高，检测窗口有所缩小，但检测体系的药理活性保持稳定。

作用通路简述

脑啡肽素在 CRL4-CRBN E3 泛素连接酶复合物中的作用脑啡肽素（CRBN）是一种广泛表达的蛋白，含 442 个氨基酸，分子量为 55 千道尔顿。

CRBN 可与 DNA 损伤结合蛋白 1（DDB1）、环指蛋白 4（Cul4）及 Cullin 蛋白调节因子 1（RoC1）结合，形成功能性 E3 泛素连接酶复合物。在该复合物中，CRBN 作为底物识别亚基，通过泛素 - 蛋白酶体系统（UPS）介导靶蛋白的蛋白酶体降解。该 E3 泛素连接酶复合物可通过识别不同底物，调控多种细胞生物学效应。

同时，CRBN 可通过调控离子通道功能，维持细胞的正常增殖与代谢。

产品规格

其他技术参数

• 应用领域：蛋白 - 蛋白相互作用研究

• 品牌：HTRF

• 检测方法：HTRF（均相时间分辨荧光检测）

• 产品类别：试剂盒

• 样本上样量：5 微升

• 运输条件：干冰运输

• 检测类型：结合实验

• 核心技术：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）

• 适用研究领域：炎症、神经科学、肿瘤与炎症

• 检测规格：500 次检测量