HTRF CEREBLON BIND. KIT - 10K PTS Cereblon蛋白结合试剂盒 –10,000测试

概述

一种快速简便的方法，用于识别 Cereblon 野生型蛋白的新型结合物。

Cereblon（也称为 CRBN）参与许多生物过程，并与增殖、凋亡、细胞代谢及许多疾病的发生密切相关。Cereblon 也是最受欢迎的两种 E3 连接酶之一，它被双功能蛋白水解靶向嵌合体（PROTACs）招募，以诱导目标蛋白泛素化并随后通过蛋白酶体降解。Cereblon 与多种蛋白质相互作用，形成功能性 E3 泛素连接酶复合物，其中 CRBN 作为该 E3 泛素连接酶复合物的底物受体，靶向蛋白质进行蛋白酶解。

因此，识别新的 Cereblon 配体是通过诱导不需要的蛋白质发生蛋白酶体依赖性降解，从而控制涉及肿瘤学、神经退行性疾病或代谢疾病的生物过程的一种方法。

工作原理

测定原理
HTRF Cereblon 结合测定采用竞争性测定形式，使用沙利度胺-红色荧光标记物作为 Cereblon 配体、GST 标签人源 Cereblon 蛋白以及抗 GST 隐花青标记抗体。您的化合物与沙利度胺-红色荧光标记物竞争，从而阻止 FRET 信号产生。

测定方案
Cereblon 结合测定可在 96 孔或 384 孔低体积白板中进行（终体积 20 µL）。如下所述，将样品或标准品直接分配到测定板中，然后加入人源 GST 标记的 Cereblon 蛋白，接着分步加入 HTRF 检测试剂：铕隐花青标记的抗 GST 抗体和 XL665 标记的沙利度胺-红色荧光标记物。标有 HTRF 荧光团的试剂可以预先混合并在单个分步中加入。无需洗涤步骤。通过按比例调整每次加入的体积，可以进一步微型化或扩大测定规模。

测定验证

筛选 Cereblon 正构配体
将多种已知的 Cereblon 配体化合物加入到测定中。来那度胺（测定标准品）、泊马度胺和沙利度胺显示出与文献良好相关的正确效力和药理排序。VH032（一种非特异性化合物，是著名的 VHL E3 连接酶正构配体）和 Nutlin3a（另一种非特异性化合物，是著名的 MDM2 E3 连接酶正构配体）对测定无影响，证实了该试剂盒对 Cereblon 结合物的特异性。

筛选 PROTAC 化合物（基于 Cereblon 配体）
将多种已知的基于 Cereblon 配体的 PROTAC 化合物加入到测定中。BSJ-04-132、BSJ-03-123、dBRD9、TL13112 和 MT802 显示出与文献良好相关的正确效力。AT11 和 CM1，两种非特异性化合物，是著名的基于 VHL 配体的 PROTAC，对测定无影响，证实了该试剂盒在仅检测基于 Cereblon 配体的 PROTAC 方面的特异性。

DMSO 对测定性能的影响
测试了不同百分比的 DMSO，从 0.4% 到 2%（孔内终浓度）。结果表明，随着 DMSO 百分比的增加，测定窗口减小，而药理学特性保持稳定。

简化路径图

Cereblon 在 CRL4-CRBN E3 泛素连接酶复合体中的作用
Cereblon（也称为 CRBN）是一种普遍表达的蛋白质，由 442 个氨基酸组成（55 kDa）。

CRBN 与 DNA 损伤结合蛋白 1（DDB1）、Cullin 4（Cul4）和 Cullins 调节因子 1（RoC1）相互作用，形成功能性 E3 泛素连接酶复合体。在该复合体中，CRBN 作为底物识别亚基，通过泛素-蛋白酶体系统（UPS）靶向蛋白质进行蛋白酶解。因此，该 E3 泛素连接酶复合体可以通过靶向不同的底物来实现不同的细胞反应。

CRBN 在大脑中的表达与记忆和学习过程相关。无义突变（R419X）是导致非综合征性智力障碍的原因之一。

CRBN 还通过调节离子通道的功能来确保正常的细胞增殖和代谢。

Cereblon 也是免疫调节药物（IMiDs）沙利度胺、泊马度胺和来那度胺的主要直接靶点，这些药物均已获得 FDA 批准用于治疗多发性骨髓瘤。这些药物通过 CRBN E3 泛素连接酶诱导淋巴转录因子 IKZF1 和 IKZF3 的泛素化和降解。

规格

其他规格