登录 • 注册 购物车 15801902527
库存查询 在线订购

当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > HTRF THALIDOMIDE - RED LIGAND 红色荧光配体

  • HTRF THALIDOMIDE - RED LIGAND 红色荧光配体
/

HTRF THALIDOMIDE - RED LIGAND 红色荧光配体

分享给好友
下载产品资料
rvty_ls_manual_64BDCRBNRED
下载SDS
rvty_ls_sds_64BDCRBNRED_US rvty_ls_sds_64BDCRBNRED_UK rvty_ls_sds_64BDCRBNRED_SPA rvty_ls_sds_64BDCRBNRED_ITA rvty_ls_sds_64BDCRBNRED_ELL rvty_ls_sds_64BDCRBNRED_DEU rvty_ls_sds_64BDCRBNRED_FRA
收藏 咨询

品牌： Revvity

  • 产品详情
  • 相关解决方案
  • 相关资源
  • 相关视频
  • 相关问答

概述

HTRF 沙利度胺 - 红色配体主要用于利用 HTRF® 技术绘制与 cereblon（ cereblon）蛋白的亲和结合曲线。


cereblon（又称 CRBN）参与多种生物学过程，与细胞增殖、凋亡、细胞代谢以及多种疾病的发生密切相关。cereblon 也是双功能蛋白水解靶向嵌合体（PROTACs）招募的两种最常用的 E3 连接酶之一，可诱导靶蛋白的泛素化及随后的蛋白酶体降解。cereblon 与多种蛋白质相互作用，形成功能性 E3 泛素连接酶复合物，其中 CRBN 作为 E3 泛素连接酶复合物的底物受体，靶向蛋白质进行水解。


HTRF 沙利度胺 - 红色配体结合检测可与 HTRF cereblon 结合试剂盒（#64BDCRBNPEG/H）联合用于协同结合研究，以监测 PROTAC 蛋白底物对 HTRF 沙利度胺 - 红色配体与 cereblon 蛋白的解离常数（Kd）的影响，从而能够借助 HTRF cereblon 结合试剂盒准确分析所监测到的协同效应。

工作原理

HTRF 沙利度胺 - 红色配体与 cereblon 蛋白的结合检测原理

HTRF 沙利度胺 - 红色配体的结合通过直接结合检测格式进行检测，该格式使用抗 GST - 铕穴状化合物抗体，该抗体可与带 GST 标签的人野生型 cereblon 结合。当染料彼此靠近时，用光源（激光或闪光灯）激发供体，会触发向受体的荧光共振能量转移（FRET），进而使受体在特定波长（665 nm）处发出荧光（图 A）。通过从总信号中减去非特异性结合信号来计算特异性结合信号，从而能够确定 HTRF 沙利度胺 - 红色配体的解离常数（Kd）（图 B）。


HTRF 沙利度胺 - 红色配体结合检测方案

HTRF 沙利度胺 - 红色配体的饱和结合实验可在 384 孔板中进行：先加入 5µL 的 9 号稀释缓冲液（用于总结合检测）或 cereblon 结合标准品（用于非特异性结合检测）；然后加入 5µL 的 PROTAC 结合缓冲液 1（用于参考）或在 PROTAC 缓冲液 1 中稀释的 PROTAC 蛋白底物（用于协同研究）；接着加入 5µL 的 GST-CRBN 蛋白；最后加入 5µL 的 HTRF 沙利度胺 - 红色配体与抗 GST 铕穴状化合物抗体的预混合溶液。在室温下孵育 3 小时后，测量 HTRF 比值。


在室温下孵育 2 小时后，测量 HTRF 比值。

检测详情

HTRF 沙利度胺 - 红色配体的解离常数（无 PROTAC 蛋白底物的参考值）：3.2nM±0.8（标准差）

检测验证

HTRF 沙利度胺 - 红色配体协同结合研究示例

HTRF 沙利度胺 - 红色配体协同结合研究示例：在与使用 HTRF CRBN 结合试剂盒进行 PROTAC 化合物筛选检测相同的条件下，监测 100nM 的模型 PROTAC 蛋白底物对 HTRF 沙利度胺 - 红色配体与 GST-CRBN 蛋白的解离常数（Kd）的影响。该示例的结果显示，此 PROTAC 蛋白底物对 HTRF 沙利度胺 - 红色配体的解离常数（Kd）无影响。


规格参数

其他规格

  • 兼容自动化：是
  • 品牌：HTRF
  • 检测方式：HTRF
  • 产品类别：荧光试剂
  • 运输条件：干冰运输
  • 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
  • 治疗领域：炎症、神经科学、肿瘤与炎症
  • 单位规格：1 单位


    没有数据
    没有数据
    没有数据
货号：64BDCRBNRED
一键复制
参考价格 ¥ 5231.53
产品规格
  • 1瓶/20微升 ￥5231.53
参考货期：3-4周
选择数量
当前规格1件起购
加入购物车 询价
相关产品推荐
上海普纳生物技术有限公司
gb(255, 255, 255);"/>

细胞裂解后，将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，加入 4 µL HTRF 磷酸化 JAK2（Tyr1007/1008）或总 JAK2 检测试剂。室温孵育 3 小时后记录 HTRF 信号。


正如预期，结果显示用鲁索替尼、托法替尼或帕瑞替尼处理后，JAK2 Y1007/1008 位点的磷酸化呈剂量依赖性抑制，而 JAK2 的表达水平保持恒定。


assay-validation-jak2-phospho-y1007-1008-3


assay-validation-jak2-phospho-y1007-1008-4


assay-validation-jak2-phospho-y1007-1008-5

siRNA 对磷酸化 JAK2（Tyr1007/1008）的下调作用

在 96 孔板中，用 2.5 µM 的 Accell siRNA（Horizon）分别特异性靶向 JAK1、JAK2、JAK3，或用非靶向 siRNA（作为对照）处理 HEL92.1.7 细胞（200,000 个细胞 / 孔），每孔体积为 100 µL。在 37°C 条件下孵育 48 小时后，加入 50 µL 完全培养基，继续在 37°C 条件下孵育 24 小时。用 100 µM 过钒酸盐刺激细胞 30 分钟，平板离心后，用 50 µL 补充的 1 号裂解缓冲液（1X）裂解细胞，将 16 µL 裂解物转移至小体积白色微孔板中，然后加入 4 µL 预混合的 HTRF 磷酸化 JAK2（Tyr1007/1008）检测抗体。室温过夜孵育后记录 HTRF 信号。


JAK2 siRNA 处理细胞后，磷酸化 JAK2（Tyr1007/1008）显著下调，与转染非靶向 siRNA 的细胞相比，信号降低了 55%。用 JAK1 或 JAK3 siRNA 处理的细胞未观察到信号降低，这证明了该试剂盒的特异性。


assay-validation-jak2-phospho-y1007-1008-6.svg

HTRF 磷酸化 JAK2（Tyr1007/1008）检测与蛋白质印迹法的比较

HEL92.1.7 细胞在 T175 培养瓶的完全培养基中于 37°C、5% CO₂条件下培养。孵育 72 小时后，先用 100 µM 过钒酸盐刺激细胞 30 分钟，然后加入 3 mL 补充的 1 号裂解缓冲液（1X），在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。


用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16 µL 各稀释液转移至小体积白色微孔板中，然后加入 4 µL HTRF 磷酸化 JAK2（Tyr1007/1008）检测试剂。使用等量的裂解物进行 HTRF 与蛋白质印迹法的平行比较。


蛋白质印迹法与 HTRF 的平行比较表明，至少在这些实验条件下，HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 8 倍。


assay-validation-jak2-phospho-y1007-1008-7.svg


简化通路

简化的 JAK2 信号通路

JAK2 与 JAK1、JAK3 或 Tyk2 共同作用，与不同类型的细胞因子 / 干扰素受体（IL2、IL4、IL6、IFNα 和 IFNγ）相互作用。细胞因子激活后，JAK2 和 JAK 家族的其他成员发生相互转磷酸化，随后激活转录因子 STAT1、STAT2、STAT3、STAT5 和 STAT6。这些转录因子继而发生二聚化并转运至细胞核，触发调控细胞分化、增殖、存活和适应性免疫反应的基因转录。


phospho-pathway-jak2-phospho-y1007-1008.svg


规格



    没有数据
    没有数据
    没有数据
货号：64JAK2Y10PEH
一键复制
参考价格 ¥ 178104.09
产品规格
  • ￥178104.09
参考货期：3-4周
选择数量
当前规格1件起购
加入购物车 询价
相关产品推荐
上海普纳生物技术有限公司