概述

在 BIR2 和 BIR3 结构域上对 cIAP1 化合物进行表征，能够实现精准的化合物谱分析和选择性研究。

工作原理

检测原理

HTRF cIAP1 BIR2 结合试剂盒采用竞争性检测模式，以链霉亲和素‑d2/LCL161‑生物素作为 cIAP1 BIR2 配体，使用 GST 标签的人源 cIAP1 BIR2 结合结构域以及抗 GST 隐穴染料标记抗体。cIAP1 结合化合物与 LCL161‑生物素配体发生竞争，从而阻止荧光共振能量转移（FRET）的发生。

检测流程

cIAP1 BIR2 结合结构域检测可在 96 孔或 384 孔低体积白色板中进行，终体积为 20 微升。按照如下方法操作：将样品或标准品直接加入检测板，随后加入 GST 标签的人源 cIAP1 BIR2 结合结构域，再加入 HTRF 试剂：铽隐穴染料标记的抗 GST 抗体，以及 d2 标记的 LCL161‑生物素 / 链霉亲和素。带有 HTRF 荧光团标记的试剂可预先混合后一次性加入。无需洗涤步骤。该检测流程可通过按比例调整各组分的加入体积进一步微型化或扩大化。

检测验证

cIAP1 正构配体与 PROTAC 配体的筛选

图 2：对基于低亲和力苯丁抑制素的 PROTAC 化合物进行了测试。苯丁抑制素是已知的 cIAP1 正构配体，结合亲和力较低，范围在 100 微摩尔至 1 毫摩尔之间。结果显示，以苯丁抑制素作为 cIAP1 配体的雌激素受体 α PROTAC 降解剂和视黄酸受体 PROTAC 降解剂效价极低，仅在 100 微摩尔以上可检测到荧光共振能量转移竞争信号。

cIAP1 BIR3 与 BIR2 结构域的化合物谱分析

对多种 cIAP1 配体进行了表征。正构化合物 LCL161（检测标准品）、GDC‑0152、A4110099.1 以及 SNIPER‑BRD4 化合物，包含 cIAP1 配体 LCL161 和 BRD4 配体 (+)-JQ-1，均表现出预期的选择性：对 BIR3 结构域亲和力高，在纳摩尔级别，对 BIR2 结构域亲和力低，在微摩尔级别。

DMSO 对检测性能的影响

测试了不同比例的 DMSO，终浓度为每孔 0.4% 至 2%。结果表明，随着 DMSO 比例升高，至少至终浓度 2%，检测窗口和半数抑制浓度（IC50）均无显著变化。

DMSO 对 cIAP1 BIR2 结合检测的影响

产品规格

其他参数

应用：蛋白质‑蛋白质相互作用

自动化兼容：是

品牌：HTRF

检测方式：HTRF

产品类别：试剂盒

样本体积：5 微升

运输条件：干冰运输

靶标类型：结合检测

技术平台：时间分辨荧光共振能量转移（TR‑FRET）

治疗领域：炎症、神经科学、肿瘤与炎症

规格：10000 次检测点