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HTRF LCL161 RED LIGAND
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品牌： Revvity
概述
HTRF LCL161 - 红色配体主要用于开展协同结合研究。该配体可用于计算在目标靶蛋白存在时，LCL161 - 红色配体与 cIAP1 BIR3 蛋白的结合亲和力。通过分别测定有无目标靶蛋白时，HTRF LCL161 - 红色配体对 cIAP1 蛋白的解离常数 Kd，可借助 HTRF cIAP1 BIR3 结合试剂盒对协同效应进行精准分析。
与其他技术相比，HTRF 检测方法具有诸多优势：均相、即加即读检测模式无需洗涤步骤背景信号低易于从 96 孔或 384 孔微孔板微型化至高密度检测形式，如 384 孔低体积板和 1536 孔板
信号稳定，检测时间与实验规模灵活可调
工作原理
HTRF LCL161 配体在 cIAP1 BIR3 结合结构域上的结合检测原理
HTRF LCL161 - 红色配体的结合采用直接结合检测模式，通过抗 GST - 铕隐穴染料抗体与带 GST 标签的人源 cIAP1 BIR3 结构域结合进行检测。当两种荧光染料距离足够接近时，供体染料在光源（激光或闪光灯）激发下，会向受体染料触发荧光共振能量转移（FRET），受体染料随即在特定波长（665 nm）处发出荧光（图 A）。特异性结合信号通过总信号减去非特异性结合信号计算得出，从而可测定 HTRF LCL161 - 红色配体的解离常数 Kd（图 B）。
HTRF LCL161 - 红色配体结合检测操作流程
HTRF LCL161 - 红色配体的饱和结合实验可在 384 孔板中进行：先加入 5 微升稀释液 9（用于测定总结合）或 cIAP1 BIR3 结合标准品（用于测定非特异性结合）。随后加入 5 微升 PROTAC 结合缓冲液 2（作为对照）或用 PROTAC 结合缓冲液 2 稀释的目标靶蛋白（用于协同作用研究），再加入 5 微升带 GST 标签的 cIAP BIR3 蛋白。最后加入 5 微升预先混合好的 HTRF LCL161 - 红色配体与抗 GST 铽隐穴染料抗体混合液。
室温孵育 2 小时后测定 HTRF 比值。
检测详情
| HTRF LCL161 - 红色配体解离常数 Kd（无 PROTAC 蛋白底物的对照条件） | 12 nM ± 10（2 倍标准差） |
检测验证
靶蛋白存在时 LCL161 - 红色配体结合亲和力（Kd）的测定
本实验中，分别在有无目标靶蛋白 BRD4（10 nM 或 100 nM）的条件下，测定 LCL161 - 红色配体与 GST-cIAP1 BIR3 蛋白的结合亲和力 Kd。结果表明，BRD4 的存在不会改变红色配体的 Kd 值。
由此说明，可利用由 cIAP 配体和 BRD4 弹头组成的 PROTAC 分子开展协同作用实验。最后，通过二元复合物（cIAP BIR3-PROTAC）中 PROTAC 的抑制常数 Ki，除以三元复合物（cIAP BIR3-PROTAC-BRD4）中 PROTAC 的抑制常数 Ki，即可计算得到协同因子 α 值。
产品规格
其他参数
自动化兼容：是
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
产品类别：荧光试剂
运输条件：干冰运输
技术平台：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：炎症、神经科学、肿瘤与炎症
规格：1 单位
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货号：64BDIAPB3RED
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