HTRF (H) KEAP1 BINDING KIT - 500 PTS

概述

KEAP1-NRF2-ARE 信号通路在氧化应激应答与维持氧化还原稳态中发挥重要作用。KEAP1（Kelch 样 ECH 相关蛋白 1）是基于 Cullin 3 的 E3 泛素连接酶的衔接亚基，参与氧化应激应答。KEAP1 通过促进泛素蛋白酶体系统介导的降解过程，调控关键转录因子 NRF2 的表达水平，而 NRF2 可调控抗氧化蛋白的表达，从而保障细胞免受氧化应激损伤。NRF2 的持续激活与肿瘤耐药相关，研究表明抑制 NRF2 可减弱耐药性。靶向蛋白降解技术利用小分子将 E3 泛素连接酶招募至目标靶蛋白附近，促进其依赖泛素化的降解。利用 KEAP1 抑制剂开发双功能蛋白降解靶向嵌合体（PROTACs），有望拓展 E3 连接酶工具库，用于清除参与癌症、神经退行性疾病、代谢紊乱等多种疾病的异常蛋白（如 NRF2）。

工作原理

检测原理

HTRF 人源 KEAP1 结合试剂盒采用竞争性检测模式，包含 KEAP1-Red 配体、GST 标签人源 KEAP1 蛋白复合物以及铽穴状化合物标记的抗 GST 抗体。与 KEAP1 结合的化合物会与 KEAP1-Red 配体产生竞争，从而阻止荧光共振能量转移的发生。

实验流程

KEAP1 结合实验可在 96 孔或 384 孔低体积白色微孔板中开展（终体积 20 微升）。实验流程如下：将样品或标准品直接加入检测板，随后加入 GST 标签 KEAP1 蛋白复合物，再加入 HTRF 检测试剂，即铽穴状化合物标记的抗 GST 抗体与红色 HTRF 受体标记的 KEAP1 配体。带有 HTRF 荧光基团的试剂可预先混合，一步加入。实验无需洗涤步骤。通过按比例调整各试剂加样体积，可进一步实现实验的微型化或规模化。

实验验证

KEAP1 正构与别构配体的筛选

Ki696 与 ML334 的效价和药理学排序与文献报道一致。而 bardoxolone 未与 KEAP1 荧光配体产生竞争，该结果与预期不符。

Ki696 对 HTRF KEAP1 结合实验与 HTRF 总 NRF2 检测实验的影响

DMSO 对实验性能的影响

研究评估了不同体积分数 DMSO（终浓度 1% 至 4%）对 HTRF KEAP1 结合试剂盒性能的影响。结果表明，DMSO 浓度升高（至少至 4%）不会对实验窗口与药理学结果产生显著影响。

产品规格

其他规格

应用：蛋白定量

品牌：HTRF

检测方式：HTRF

产品类别：试剂盒

样本体积：5 微升

运输条件：干冰运输

靶标类型：生物标志物

靶标物种：人源

技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）

规格：500 次检测点数