概述

KEAP1-NRF2-ARE 信号通路在应对氧化应激、维持氧化还原稳态中发挥重要作用。KEAP1（Kelch 样 ECH 相关蛋白 1）是基于 Cullin 3 的 E3 泛素连接酶的衔接亚基，参与氧化应激应答。KEAP1 通过促进泛素 - 蛋白酶体系统（UPS）介导的降解，调控关键转录因子 NRF2 的表达水平；NRF2 可调控抗氧化蛋白的表达，从而保障细胞免受氧化应激损伤。NRF2 的持续激活与肿瘤耐药相关，而抑制 NRF2 则可降低耐药性。

作用原理

检测原理

人源 KEAP1 结合 HTRF 检测试剂盒采用竞争性检测模式，使用 KEAP1-Red 配体、带 GST 标签的重组人源 KEAP1 蛋白复合物，以及铽穴状化合物标记的抗 GST 抗体。可与 KEAP1 结合的化合物会与 KEAP1-Red 配体产生竞争，进而阻止荧光共振能量转移（FRET）的发生。

检测流程

KEAP1 结合实验可在 96 孔或 384 孔低体积白色微孔板中进行（终体系 20 µL）。按如下方法操作：将样品或标准品直接加入检测板，随后加入带 GST 标签的 KEAP1 蛋白复合物，再加入 HTRF 检测试剂 —— 铽穴状化合物标记的抗 GST 抗体，以及红色 HTRF 受体标记的 KEAP1 配体。带 HTRF 荧光基团的试剂可预先混合后一次性加样。实验无需洗涤步骤。通过按比例调整各试剂加样体积，可进一步实现实验体系的微型化或扩大化。

检测验证

正构与别构（变构）KEAP1 配体的筛选

Ki696 与 ML334 的效价及药理学排序与文献报道一致；而巴多克索酮未与 KEAP1 荧光配体产生竞争，该结果与预期不符。

Ki696 在 KEAP1 结合 HTRF 实验与总 NRF2 HTRF 实验中的作用

DMSO 对检测性能的影响

研究在不同终浓度 DMSO（1% 至 4%）条件下评估了 KEAP1 结合 HTRF 试剂盒的性能。结果表明，DMSO 浓度升高（至少至 4%）未对检测窗口及药理学结果产生显著影响。

产品规格

其他参数

应用方向：蛋白定量

品牌：HTRF

检测方式：HTRF

产品类别：试剂盒

样本体积：5 µL

运输条件：干冰运输

靶点：KEAP1

靶点类型：生物标志物

靶点物种：人源

技术类型：TR-FRET

规格：10,000 次检测