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HTRF MI-1061 RED LIGAND

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概述

TRF MI-1061 红色配体主要用于通过 HTRF® 技术绘制与 MDM2 蛋白的亲和结合曲线。

MDM2，又称鼠双微体蛋白 2，参与多种生物学过程，与 DNA 修复、细胞周期停滞、细胞凋亡以及多种疾病的发生密切相关。MDM2 是应用最广泛的 E3 泛素连接酶之一，可被双功能蛋白降解靶向嵌合体（PROTACs）招募，介导靶蛋白发生泛素化并随后被蛋白酶体降解。MDM2 可与多种蛋白质相互作用形成功能性 E3 泛素连接酶复合物，在复合物中作为底物受体，将多种蛋白作为靶标进行蛋白酶体降解。

因此，发现新型 MDM2 配体是调控肿瘤、神经退行性疾病或代谢性疾病相关生物学过程的一种途径，可通过诱导 p53 等蛋白的蛋白酶体依赖性降解实现。

HTRF MI-1061 红色配体结合实验可与 HTRF MDM2 结合试剂盒（#64BDMDM2PEG/H）联合使用，用于协同结合研究，监测 PROTAC 蛋白底物对 HTRF MI-1061 红色配体与 MDM2 蛋白解离常数 Kd 的影响，从而实现对 HTRF MDM2 结合试剂盒所检测协同效应的精准分析。

工作原理

HTRF MI-1061 配体与 MDM2 蛋白结合实验原理

HTRF MI-1061 红色配体的结合采用直接结合实验模式检测，使用抗 GST - 铕穴状化合物抗体，该抗体可与带 GST 标签的人源 MDM2 蛋白结合。当荧光染料距离足够接近时，光源（激光或闪光灯）激发供体荧光，会触发向受体的荧光共振能量转移（FRET），受体随后在特定波长（665 nm）处发出荧光（图 A）。特异性结合信号通过总信号减去非特异性结合信号计算得出，从而可测定 HTRF MI-1061 红色配体的解离常数 Kd（图 B）。

HTRF MI-1061 红色配体结合实验流程

HTRF MI-1061 红色配体的饱和结合实验可在 384 孔板中进行：先加入 5 微升稀释液 9 缓冲液（用于总结合检测）或 MDM2 标准品（用于非特异性结合检测），再加入 5 微升 PROTAC 结合缓冲液 3（作为对照）或经 PROTAC 结合缓冲液 3 稀释的 PROTAC 蛋白底物（用于协同结合研究），随后加入 5 微升带 GST 标签的 MDM2 蛋白，最后加入 5 微升预先混合的 HTRF MI-1061 红色配体与抗 GST 铕穴状化合物抗体溶液。

室温孵育 1 小时后，检测 HTRF 比值。

实验验证

采用 HTRF MI-1061 红色配体进行协同结合研究示例

本示例采用 HTRF MI-1061 红色配体开展协同结合研究，在与使用 HTRF MDM2 结合试剂盒进行 PROTAC 化合物筛选实验相同的条件下，监测 20 纳摩尔浓度模型 PROTAC 蛋白底物对 HTRF MI-1061 红色配体与带 GST 标签 MDM2 蛋白解离常数 Kd 的影响。示例结果显示，该 PROTAC 蛋白底物对 HTRF MI-1061 红色配体的 Kd 无影响。

规格

其他参数

自动化兼容：是

品牌：HTRF

检测方式：HTRF

产品类别：荧光试剂

运输条件：干冰运输

靶点：MI-1061

技术：TR-FRET

治疗领域：炎症、神经科学、肿瘤学与炎症

规格：1 单位

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货号：64BDMDM2RED

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