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当前位置:首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > HTRF (H) RIG-I BIND. KIT - 10K PTS

概述

本产品可快速、简便地筛选能与人维甲酸诱导基因 I(RIG-I)结合的新型结合物。维甲酸诱导基因 I(RIG-I)是一种胞质模式识别受体,可识别细胞内的 RNA 病原体。该蛋白参与先天免疫系统调控,并能诱导 I 型干扰素应答。RIG-I 蛋白通过识别病毒双链 RNA 来感知被感染细胞。在被双链 RNA 激活后,RIG-I 的 N 端结构域会与线粒体抗病毒信号蛋白结合,进而激活 I 型干扰素信号通路。
与其他技术相比,均相时间分辨荧光共振能量转移(HTRF)检测法具有诸多优势:
  • 均相 “加样即读数” 操作模式
  • 无需洗涤步骤
  • 背景信号低
  • 易于微型化,可从 96 孔或 384 孔微孔板适配至高密度检测体系,如 384 孔低体积板和 1536 孔板
  • 信号稳定,检测时间与实验规模灵活可调

检测原理

HTRF 法人源 RIG-I 结合实验采用竞争性检测模式,实验试剂包括生物素标记的 3' 端磷酸化双链 RNA、链霉亲和素 - d2、带 6× 组氨酸标签的人源 RIG-I 蛋白,以及抗 6× 组氨酸标记的隐穴染料抗体。待测化合物会与生物素标记的 3' 端磷酸化双链 RNA 产生竞争结合,从而抑制荧光共振能量转移(FRET)的发生。

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检测流程

人源 RIG-I 结合实验可在 96 孔或 384 孔低体积白色微孔板中开展(终反应体系 20 微升)。按如下步骤操作:将样品或标准品直接加入检测板,随后加入带组氨酸标签的人源 RIG-I 蛋白,再添加 HTRF 检测试剂,即铽隐穴染料标记的抗 6× 组氨酸抗体,以及结合 d2 标记链霉亲和素的生物素化 3' 端磷酸化双链 RNA。带有 HTRF 荧光基团的试剂可预先混合后一次性加样。全程无需洗涤。该流程可通过按比例调整各试剂加样体积,进一步实现微型化或规模化检测。

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实验验证

5' 端三磷酸化双链 RNA 与平末端双链 RNA 对 RIG-I 结合的影响

在 HTRF 法人源 RIG-I 结合实验中同步检测两种不同的双链 RNA:第一种双链 RNA 的 5' 端带有三磷酸基团,第二种则无。将两种 RNA 分别用稀释液进行梯度稀释,随后加入 RIG-I 蛋白,再向孔板中加入 HTRF 检测试剂完成最终检测步骤。室温孵育 1 小时后采集结果。结果显示,与预期一致,双链 RNA 5' 端三磷酸基团的存在可提升 RIG-I 蛋白的结合亲和力。

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产品规格

其他参数

  • 应用方向:蛋白质 - 蛋白质相互作用研究
  • 适配自动化操作:是
  • 品牌:HTRF
  • 检测方式:HTRF
  • 产品类别:检测试剂盒
  • 样品体积:5 微升
  • 运输条件:干冰运输
  • 检测靶点:RIG-I
  • 靶点类型:结合实验
  • 靶点物种:人源
  • 技术原理:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
  • 适用治疗领域:感染性疾病、肿瘤与炎症
  • 规格:10000 次检测量


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