概述
血管紧张素转化酶 2(ACE2)是一种人体细胞表面受体,已被证实为新型冠状病毒(SARS-CoV-2)病毒颗粒入侵宿主细胞的主要入口。病毒通过自身刺突蛋白 S1 亚基与 ACE2 进行识别并结合。因此,这一相互作用是新冠肺炎(COVID-19)治疗研究的关键靶点,其抑制剂可通过阻断新冠病毒侵入细胞发挥保护作用。基于此,适用于 ACE2 - 刺突蛋白抑制剂筛选的蛋白 - 蛋白相互作用检测方法,对当前相关研究具有重要意义。
均相时间分辨荧光共振能量转移(HTRF)检测技术相较其他技术具备多项优势:
- 均相 “加样即读数” 操作模式
- 无需洗涤步骤
- 背景信号低
- 易于实现微型化,可从 96 孔或 384 孔微孔板直接适配至高密度检测体系,如 384 孔低体积板和 1536 孔板
信号稳定,检测时间与实验规模灵活可调
检测原理
S1/ACE2 蛋白 - 蛋白相互作用检测体系可模拟新型冠状病毒刺突蛋白 S1,与 I 型、II 型肺泡上皮细胞、内皮细胞以及支气管纤毛上皮细胞表面表达的血管紧张素转化酶 2(ACE2)受体的结合过程。本试剂盒可用于筛选能够干扰或阻断新型冠状病毒感染的药物或抗体。

检测流程
向 384 孔低体积微孔板中加入 4 微升样品,样品可为蛋白质、抗体或候选药物。向同一孔中加入 8 微升 d2 标记的刺突蛋白 S1,以及 8 微升隐穴染料标记的 ACE2。将微孔板在 4℃条件下孵育 24 小时,随后使用专用时间分辨荧光读数仪进行检测。

实验验证
采用未标记 S1 与 ACE2 蛋白验证 S1/ACE2 结合试剂盒
向 384 孔低体积微孔板中加入 4 微升未标记的 S1 或 ACE2 蛋白,向同一孔中加入 8 微升 d2 标记的刺突蛋白 S1,以及 8 微升隐穴染料标记的 ACE2。将微孔板在 4℃条件下孵育 24 小时,随后使用专用时间分辨荧光读数仪进行检测。

采用中和性抗体对照验证 S1/ACE2 结合试剂盒
向 384 孔低体积微孔板中加入 4 微升中和性抗体,向同一孔中加入 8 微升 d2 标记的刺突蛋白 S1,以及 8 微升隐穴染料标记的 ACE2。将微孔板在 4℃条件下孵育 24 小时,随后使用专用时间分辨荧光读数仪进行检测。

产品规格
其他参数
- 应用方向:蛋白 - 蛋白相互作用研究
- 品牌:HTRF
- 检测方式:HTRF
- 产品类别:试剂盒
- 样品体积:4 微升
- 运输条件:干冰运输
- 靶点类型:结合实验
- 技术原理:时间分辨荧光共振能量转移(TR-FRET)
- 适用治疗领域:感染性疾病
- 规格:10000 次检测量