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HTRF STAT3 TOTAL KIT - 10K PTS 总STAT3检测试剂盒 - 10,000测试

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概述

Total STAT3（总信号转导与转录激活因子 3）细胞检测试剂盒旨在监测 STAT3 的表达水平，无论其处于磷酸化还是非磷酸化状态。该试剂盒可与我们的磷酸化 STAT3（Phospho-STAT3）试剂盒兼容，能从单个样本中分析磷酸化蛋白和总蛋白，助力更准确解读 JAK/STAT 信号通路活性。

工作原理

Total-STAT3 检测原理

Total-STAT3 检测可定量分析细胞裂解液中 STAT3 的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。Total-STAT3 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对 STAT3 蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 STAT3 时，加入这些偶联抗体后，供体荧光团会与受体荧光团近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样本中 STAT3 蛋白的浓度直接成正比，且在免清洗检测格式下可用于评估蛋白表达水平。

phospho-how-it-works-total-stat3-assay-principle

Total-STAT3 双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行裂解，再将裂解液转移至 384 孔小体积检测板，最后加入 Total-STAT3 HTRF 检测试剂。该方案可监测细胞的存活率和融合度。

phospho-how-it-works-total-stat3-2-plate-assay-protocol

Total-STAT3 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 STAT3 时，可在同一块微孔板中完成细胞培养、刺激和裂解操作。该方案无需清洗步骤，是专为高通量筛选（HTS）设计的检测方法，能在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

phospho-how-it-works-total-stat3-1-plate-assay-protocol

检测验证

利用 Total-STAT3 检测对比 HTRF 与蛋白质印迹法（WB）

将 HEK293 细胞在 T175 培养瓶中，于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。移除细胞培养基后，加入 3mL 补充后的裂解缓冲液，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液。取等量裂解液进行 WB 与 HTRF 平行对比（150,000 个细胞约对应 20μg 总蛋白）。两种方法灵敏度水平相当：每种技术均可检测到 1172 个细胞。

assay-validation-stat3-total-1