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HTRF (H/M) PLK1 P-T210 KIT - CTRL LYSATE

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概述

这款基于细胞的均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂盒可对苏氨酸 210 位点磷酸化的 polo 样激酶 1（PLK1）进行快速定量检测。Polo 样激酶 1（PLK1）是高度保守的丝氨酸 / 苏氨酸激酶家族中的核心成员，对细胞分裂（有丝分裂）至关重要，因此是细胞周期中 G2/M 检查点的关键调控因子。

PLK1 在细胞周期调控中的激活机制：PLK1 可被 AurA 激酶磷酸化苏氨酸 210 位点而激活，激活后的 PLK1 会进一步磷酸化 CDC25。

PLK1 是调控有丝分裂及细胞周期进程 / 细胞增殖的关键蛋白，这使其成为极具吸引力的癌症治疗靶点。

工作原理

磷酸化 PLK1（苏氨酸 210 位点）检测原理

均相时间分辨荧光（HTRF）磷酸化 PLK1（苏氨酸 210 位点）检测可对苏氨酸 210 位点磷酸化的 PLK1 进行定量。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全微孔板检测模式，无需使用凝胶、进行电泳或转膜操作。磷酸化 PLK1（苏氨酸 210 位点）检测采用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。当蛋白质发生磷酸化时，会形成由两种标记抗体共同参与的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样本中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且可通过 “免洗涤” 检测模式评估蛋白质的磷酸化状态。

assay-principle-phospho-t210-plk1-64plkt2peg（图示：磷酸化 PLK1（苏氨酸 210 位点）检测原理）

磷酸化 PLK1（苏氨酸 210 位点）双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行裂解；将裂解液转移至 384 孔小体积检测板后，加入磷酸化 PLK1（苏氨酸 210 位点）均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂。该方案可实现对细胞存活率和融合度的监测。

assay-protocol-how-it-works-phospho-t210-plk1-64plkt2peg（图示：磷酸化 PLK1（苏氨酸 210 位点）双板检测方案）

磷酸化 PLK1（苏氨酸 210 位点）单板检测方案

使用均相时间分辨荧光（HTRF）试剂检测总 PLK1 时，可在同一块用于细胞培养、刺激和裂解的微孔板中完成检测，无需洗涤步骤。

该方案专为高通量筛选（HTS）设计，能在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的均相时间分辨荧光（HTRF）检测质量。

assay-protocol-how-it-works-phospho-t210-plk1-64plkt2peg（图示：磷酸化 PLK1（苏氨酸 210 位点）单板检测方案）