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取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板中,加入 4 微升 HTRF 磷酸化或总 c-Src 检测试剂,孵育 4 小时后记录 HTRF 信号。
(图示标注:assay-validation-c-src-phospho-y419-4.svg,即 “H₂O₂激活 A431 细胞 c-Src 的实验结果图”)
在 96 孔培养板中接种经培养处理的人 HepG2 肝细胞癌细胞、人 HeLa 宫颈癌细胞和人 MCF-7 乳腺癌细胞。孵育后,用 50 微升 3 号补充型裂解缓冲液在室温下轻柔振荡裂解细胞 30 分钟。
取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板中,加入 4 微升 HTRF 磷酸化或总 c-Src 检测试剂,孵育 4 小时后记录 HTRF 信号。
(图示标注:assay-validation-c-src-phospho-y419-5.svg,即 “多种人类癌细胞系中 c-Src 检测的验证结果图”)
将小鼠 NIH/3T3 胚胎成纤维细胞以不同密度接种到 96 孔板中,在 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 24 小时。次日,用浓度递增的 H₂O₂处理细胞 10 分钟,之后移除培养基,用 50 微升 3 号补充型裂解缓冲液在室温下轻柔振荡裂解细胞 30 分钟。
取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板中,加入 4 微升 HTRF 磷酸化或总 c-Src 检测试剂,孵育 4 小时后记录 HTRF 信号。
(图示标注:assay-validation-c-src-phospho-y419-6.svg,即 “H₂O₂处理的 NIH/3T3 细胞密度实验结果图”)
将 HEK293 细胞接种并培养 24 小时,先用浓度递增的博舒替尼处理细胞,再用 H₂O₂刺激细胞 10 分钟,之后移除培养基,分别用 ELISA(酶联免疫吸附试验)或 HTRF 试剂盒试剂裂解细胞。
检测 HTRF 信号和比色 ELISA 信号,结果显示:两种方法测得的博舒替尼 IC50(半数抑制浓度)值相近,表明 HTRF 检测与 ELISA 检测具有良好的相关性。
(图示标注:assay-validation-c-src-phospho-y419-7.svg,即 “HEK293 细胞中 c-Src HTRF 检测与 ELISA 检测的相关性结果图”)
c-Src 是一种膜相关非受体蛋白酪氨酸激酶,在所有细胞类型中均有广泛表达。当 c-Src 的 Tyr530 位点发生磷酸化时,激酶处于失活状态;而 Tyr530 位点去磷酸化后,Tyr419 位点发生自磷酸化,是 c-Src 完全激活的标志。
c-Src 主要由受体酪氨酸激酶(RTKs)、整合素和活性氧(ROS)激活,是关键的信号中介分子,可调控多种信号通路,如 AKT 通路、MAPK 通路、STAT 通路和 NF-κB 通路,进而参与调节细胞增殖、分化、存活、形态形成、黏附和迁移过程。因此,精确调控 Src 活性对正常细胞生长至关重要。
作为一种原癌基因衍生的基因,c-Src 在多种人类癌症(如乳腺癌、结肠癌和胰腺癌)中存在过表达且活性高度激活的情况,使其成为癌症治疗领域极具潜力的靶点。
(图示标注:phospho-pathway-c-src-64srcpeg-64srcpeh-64srcpey.svg,即 “c-Src 信号通路简化示意图”)
- 应用领域:细胞信号传导
- 品牌:HTRF
- 检测方式:HTRF(均相时间分辨荧光)
- 裂解缓冲液兼容性:3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
- 分子修饰类型:磷酸化(Phosphorylation)
- 产品类别:试剂盒(Kit)
- 样本体积:16 微升(µL)
- 运输条件:干冰运输
- 靶点类别:磷酸化蛋白
- 靶点物种:人、小鼠
- 技术平台:TR-FRET(时间分辨荧光共振能量转移)
- 治疗领域:肿瘤学与炎症(Oncology & Inflammation)
- 单位规格:500 个检测点