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portant;">人源 HCT116 细胞中 Rb 总蛋白均相时间分辨荧光检测与蛋白质印迹法的比较
将人源 HCT116 细胞在 T175 培养瓶中,于 37°C、5% 二氧化碳条件下培养。当细胞融合度达到 80% 时,裂解细胞并通过离心收集可溶性上清液。对细胞裂解液进行系列稀释,取 16 微升各稀释度裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板,最终加入 Rb 总蛋白细胞检测试剂盒试剂。


平行对比结果显示:Rb 总蛋白均相时间分辨荧光检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 27 倍。


assay-validation-rb-total-2(图示:Rb 总蛋白检测与蛋白质印迹法比较验证)


简化通路

细胞分裂周期中的视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)

分子量为 110 千道尔顿(kDa)的视网膜母细胞瘤蛋白(Rb)属于口袋蛋白家族,该家族还包括 p107 和 p130 蛋白。


Rb 作为肿瘤抑制因子,可调控细胞周期进程。当 Rb 发生失活突变时,会引发视网膜母细胞瘤 —— 此时视网膜细胞无法正常更新,且会暴露于高剂量致突变紫外线辐射下。


在无有丝分裂信号时,具有活性的去磷酸化 Rb 会结合并抑制 E2F 转录因子,而 E2F 是细胞进入 S 期(DNA 合成期)所必需的。通过维持 E2F 的失活状态,Rb 可使细胞停留在 G1 期,阻止细胞周期继续推进。


当存在有丝分裂信号时,Rb 会被细胞周期蛋白 D - 细胞周期蛋白依赖性激酶 4/6(cyclin D-CDK4/6)依次磷酸化,随后再被细胞周期蛋白 E - 细胞周期蛋白依赖性激酶 2(cyclin E-CDK2)磷酸化,最终失活。这一磷酸化过程会促使 E2F 转录因子释放。


最终,E2F 会激活多种基因的转录,如细胞周期蛋白(cyclins)、细胞周期蛋白依赖性激酶(Cdk)、胸苷激酶(Thymidine kinase)和增殖细胞核抗原(PCNA)等 —— 这些基因在 DNA 合成、复制及细胞分裂中发挥关键作用。


phospho-pathway-rb-total-63adk106peg(图示:Rb 总蛋白相关细胞周期信号通路)


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