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ALPHA.SF ULTRA RNA POL II PS5, 500

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品牌： Revvity

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概述

RNA 聚合酶 II（RNA Polymerase II，简称 RNAP II 或 Pol II）是真核细胞细胞核中三种 RNA 聚合酶之一，负责以编码蛋白质的 mRNA 和部分小型非编码 RNA 形式展开遗传程序。Pol II 需结合多种转录因子才能与基因上游启动子结合并启动转录过程。靶向 Pol II 转录机制的抑制剂是治疗多种癌症和复杂疾病的潜在疗法。


AlphaLISA SureFire 人源和小鼠源磷酸化 RNA 聚合酶 II（Ser5）检测试剂盒是一种基于 Alpha 技术的夹心免疫分析方法，用于定量检测细胞裂解物中的磷酸化 RNA 聚合酶 II（Ser5）。


规格

  • HV（高容量）试剂盒：包含在 96 孔板中进行 100 孔检测的试剂，使用 60 微升反应体积。
  • 500 检测点试剂盒：包含在 384 孔板中进行 500 孔检测的试剂，使用 20 微升反应体积。
  • 10,000 检测点试剂盒：包含在 384 孔板中进行 10,000 孔检测的试剂，使用 20 微升反应体积。
  • 50,000 检测点试剂盒：包含在 384 孔板中进行 50,000 孔检测的试剂，使用 20 微升反应体积。


兼容性

  • 细胞和组织裂解物
  • 抗体调节剂
  • 生物治疗抗体


用途

  • 细胞激酶检测
  • 受体激活研究

  • 筛选


其他规格


应用：细胞信号传导
是否兼容自动化操作：是
品牌：AlphaLISA SureFire Ultra
检测方式：Alpha
裂解缓冲液兼容性：裂解缓冲液
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样本体积：10 微升
运输条件：采用蓝冰运输
靶标：RNA 聚合酶 II
靶标类别：磷酸化蛋白质
靶标物种：人类
靶标物种：小鼠
技术：Alpha
治疗领域：肿瘤学
单位规格：500 个检测点


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货号：ALSU-PRNAP-B500
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ATR/CHK1 或 ATM/CHK2 通路抑制剂对 CHK1 磷酸化和总蛋白的影响

将人 HEK293 细胞以 100,000 个细胞 / 孔的密度接种到 96 孔培养处理板的完全培养基中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育过夜。用 3 种 ATR 或 ATM 通路抑制剂以剂量反应方式在 37°C、5% CO₂条件下处理细胞 2 小时。然后用 3µM 新制癌菌素（EC80）在 37°C、5% CO₂条件下再处理细胞 2 小时。移除培养基，然后用 50µl 补充的 1 号裂解缓冲液（1X）在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。细胞裂解后，将 16µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4µL HTRF 磷酸化 CHK1（丝氨酸 345）或总 CHK1 检测试剂。在室温下过夜孵育后记录 HTRF 信号。


已知咖啡因是一种温和的 ATR/ATM 通路抑制剂，UCN-1 是一种强效 CHK1 抑制剂，而 KU55933 仅是 ATM 通路抑制剂。正如预期，UCN-1 能以高活性（半数抑制浓度（IC50）为 15nM）完全抑制 CHK1 磷酸化，而咖啡因的活性较弱。KU55933 化合物未诱导 CHK1 磷酸化抑制。


另一方面，这 3 种测试化合物均未影响 CHK1 总蛋白的表达水平。


human-mouse-phospho-CHK1-detection-kit（人 / 小鼠磷酸化 CHK1 检测试剂盒）


human-mouse-phospho-CHK1-detection-kit（人 / 小鼠磷酸化 CHK1 检测试剂盒）

HTRF 磷酸化 CHK1（丝氨酸 345）检测与蛋白质印迹法的比较

将 HEK293 细胞在 T175 培养瓶的完全培养基中于 37°C、5% CO₂条件下培养至汇合。


移除培养基后，用 3mL 补充的 1 号裂解缓冲液（1x）在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞。


使用补充的 1 号裂解缓冲液（1x）对细胞裂解物进行系列稀释，将 16µL 纯样品和每种稀释液转移至 384 孔小体积微孔板中，然后加入 4µL HTRF 磷酸化丝氨酸 345 CHK1 检测试剂。过夜后记录信号。


将等量的裂解物上样到凝胶中，对 HTRF 检测与蛋白质印迹法进行平行比较。


在这些条件下，HTRF 磷酸化丝氨酸 345 CHK1 检测与蛋白质印迹法的灵敏度相当。


human-mouse-phospho-CHK1-detection-kit（人 / 小鼠磷酸化 CHK1 检测试剂盒）


简化通路

ATM/CHK2 和 ATR/CHK1 信号通路

双链断裂（DSBs）或单链断裂（SSBs）是最有害的损伤之一，可能威胁基因组完整性。这类损伤可由细胞代谢物的作用或 DNA 损伤剂（如遗传毒性化合物、化疗药物、紫外线（UV）照射或电离辐射）诱导产生。


DNA 损伤应答（DDR）主要由共济失调毛细血管扩张症突变蛋白（ATM）和共济失调毛细血管扩张症及 Rad3 相关蛋白（ATR）控制，它们是磷酸肌醇 3 - 激酶（PI3K）相关激酶（PIKK）蛋白激酶家族的两个成员。


在应对 DNA 损伤（SSBs）时，ATR–Chk1 通路和复制检查点应答会被激活，介导 G2/M 检查点以阻止细胞周期进程，为 DNA 修复争取额外时间。ATR 通过其相互作用伙伴 ATRIP 被招募到单链 DNA-RPA 复合体处，这会导致 Chk1 磷酸化和激活。CHK1 激活涉及信号转导通路，直至调节 cdc2 / 周期蛋白 B1 活性和控制 Cdc25A。


许多癌症在 G1/S 检查点存在缺陷，包括那些 p53 缺陷的癌症。如果由于 DNA 损伤，G1 检查点缺陷细胞中的 ATR 通路受到抑制，细胞将不会引发细胞周期停滞以进行 DNA 修复，从而导致癌细胞死亡。因此，抑制 ATR 通路已成为一种有吸引力的策略，可选择性地使 p53 缺陷细胞对损伤 DNA 的化疗药物敏感。


创新小分子 Chk1 和 Chk2 抑制剂的鉴定，以及检查点调节新策略与传统放疗和化疗方式相结合的验证，为改善癌症治疗带来了希望。


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