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ALPHA.SF ULTRA P27 KIP1 TOTAL, LYSATE

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品牌： Revvity

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概述


这种对照裂解液适用于 AlphaLISA SureFire Ultra 人源及小鼠源总 p27 KIP1 检测试剂盒，也可供在进行 SureFire 检测的同时开展正交检测或二次检测的人员用作对照样本。为制备该裂解液，将 MCF7 细胞在含有 10% 胎牛血清（FBS）的培养基中于 T175 培养瓶中培养至汇合状态，然后用 4 毫升的 SureFire Ultra 裂解缓冲液进行裂解。


规格


其他规格

  • 应用领域：细胞信号传导
  • 自动化兼容性：支持
  • 品牌：AlphaLISA SureFire Ultra
  • 检测方式：Alpha
  • 裂解缓冲液兼容性：裂解缓冲液
  • 分子修饰类型：总量
  • 产品类别：对照裂解液
  • 运输条件：蓝冰运输
  • 靶标：p27 KIP1
  • 靶标类别：磷酸化蛋白质
  • 靶标物种：人类、小鼠
  • 技术：Alpha
  • 治疗领域：肿瘤学
  • 单位规格：1 瓶


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货号：ALSU-TP27K-A-L
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总 EGFR DEL19 检测在相关 EGFR 突变细胞系中的验证

使用 HTRF 总 EGFR DEL19 试剂盒在不同细胞系中评估总 EGFR DEL19 的表达水平：H1975 和 H3255 细胞（表达 EGFR L858R 突变体）、A431 和 A549 细胞（表达野生型 EGFR）以及 H1650 和 HCC827 细胞（表达 EGFR DEL19 突变体）。


将不同细胞系在完全培养基中于 T175 培养瓶中在 37°C、5% CO₂条件下培养。孵育 48 小时后，用 3 mL 补充裂解缓冲液 #4（1X）在室温下轻轻摇晃 30 分钟以裂解细胞。将 16 µL 各稀释 2 倍的裂解物转移至小体积白色微孔板中，再加入 4 µL HTRF 总 EGFR DEL19 检测试剂。


正如预期，在 H1975、H3255、A431 和 A549 细胞系中未检测到信号，这表明 HTRF 总 EGFR DEL19 试剂盒仅特异性检测突变型 EGFR DEL19。


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HTRF 总 EGFR DEL19 检测与蛋白质印迹法的比较

将 HCC827 细胞在完全培养基中于 T175 培养瓶中在 37°C、5% CO₂条件下培养。孵育 48 小时后，用 3 mL 补充裂解缓冲液 #4（1X）在室温下轻轻摇晃 30 分钟以裂解细胞。


用补充裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，将 16 µL 各稀释液转移至小体积白色微孔板中，再加入 4 µL HTRF 总 EGFR DEL19 检测试剂。使用等量的裂解物进行 HTRF 与蛋白质印迹法的平行比较。


在这些条件下，HTRF 总 EGFR DEL19 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 64 倍。


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简化通路

总 EGFR 信号通路

EGFR 是一种属于 ErbB 家族的受体酪氨酸激酶。EGFR 配体的结合会促使受体发生同源二聚化或异源二聚化，进而激活 EGFR 的酪氨酸激酶结构域和特定的酪氨酸残基。


磷酸化的酪氨酸残基随后会为多种因子提供停靠位点，这些因子会诱导多个信号转导级联反应的下游激活。


从 EGF 受体传递至细胞核的信号会调控多种生物学功能，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。


导致 EGFR 过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，这使得 EGFR 成为抗癌治疗的关键靶点。


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