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HTRF EGFR P-Y1068 KIT - 500 PTS 磷酸化EGFR(Y1068)检测试剂盒 - 500测试

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概述

磷酸化 EGFR 检测试剂盒旨在基于细胞对 EGFR 上的 Tyr1068 磷酸化进行定量检测。导致 EGFR（也称为 ErbB1 或 HER1）过表达或过度激活的突变与多种癌症相关，如肺癌、结直肠癌、前列腺癌、胶质母细胞瘤等。这使得 EGFR 成为抗癌治疗相关免疫检测的关键靶点。

工作原理

磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测原理

磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测用于测定在 Tyr1068 位点发生磷酸化的 EGFR。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能独立于磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使两种标记抗体形成免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且在免洗涤的检测形式下为评估蛋白质的磷酸化状态提供了方法。

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磷酸化 EGFR（Tyr1068）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化 EGFR（Tyr1068）HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

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磷酸化 EGFR（Tyr1068）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 EGFR（Tyr1068）可在单个用于培养、刺激和裂解的培养板中完成，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化操作，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

HTRF 磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测与蛋白质印迹法（WB）的比较

将人 A431 细胞培养 48 小时，用 100 ng/mL EGF 刺激 10 分钟。裂解后，通过离心收集可溶性组分。用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 进行平行分析。使用 HTRF 磷酸化 EGFR（Tyr1068）检测时，仅需 100 个细胞即可检测到最低信号，而蛋白质印迹法需要 3120 个细胞才能产生信号。HTRF 磷酸化 EGFR 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 30 倍，且相关性良好。

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phospho-egfr-tyr1068t: 28px; margin-top: 24px; overflow-anchor: auto; margin-bottom: 8px !important; padding-bottom: 0px !important;">HTRF 磷酸化 MKK4（Ser257）细胞检测与蛋白质印迹法的比较

将人 HepG2 细胞系接种到 T175 培养瓶中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育。然后用山梨糖醇（1M）刺激细胞 30 分钟后进行裂解。

用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16µL 各稀释液转移到小体积白色微孔板中，加入 4µL HTRF 磷酸化 MKK4（Ser257）检测试剂。使用等量的裂解物进行 HTRF 与蛋白质印迹法的平行比较。

使用 HTRF 磷酸化 MKK4（Ser257）检测时，每孔 310 个细胞就足以检测到信号，而使用依赖化学发光信号的蛋白质印迹法则需要 5,000 个细胞。这些结果表明，HTRF 磷酸化 MKK4（Ser257）检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 16 倍。

简化通路

MKK4 检测的简化通路

MKK4（丝裂原活化激酶激酶 4）是 MAP 激酶激酶家族的成员，在不同的 MKKK（如 TAK1 或 ASK1）激活后，通过 Ser257 位点的磷酸化而被激活，以响应诸如 GPCR 激活、生长因子、细胞应激或炎症细胞因子等刺激。反过来，活化的 MKK4 磷酸化 JNK 或 p38，以激活 c-jun、p53 或 ATF2，并通过调节基因转录诱导炎症、细胞存活 / 凋亡、增殖或分化。

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、神经科学、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点