抗体药物研发
抗体药物研发
在药物研发领域，抗体药占据及其重要的位置，从市场规模来看，目前抗体药占整个生物药市场份额约40%左右，且市场份额仍在不断增长。抗体药包括单抗、双抗/多抗和ADC等类型，大多数上市的抗体药使用的重链亚型是IgG1，也有少数使用IgG2重链和IgG4重链，轻链类型上，则以κ轻链为主。抗体药的不断创新和发展对高通量检测技术提出了更高的诉求。
瑞孚迪基于HTRF和AlphaLISA均相检测平台，可提供抗体药物研发不同阶段的高通量检测试剂，帮您准确、快速地完成多种样本的检测。
一、抗体筛选和修饰
抗体筛选是抗体发现中的重要环节，对抗体发现的结果起到关键作用。在筛选早期，选择合适的高通量筛选技术显得尤为重要。
瑞孚迪基于HTRF和AlphaLISA均相检测技术，提供一些列抗体筛选试剂盒和toolbox，实验过程中无需洗板，只需要“加样-孵育-读板”，2h即可完成检测。利用该试剂盒，一方面可以实现高通量的抗体筛选，另一方面，因为无需洗板，对于一些低亲和力的阳性抗体，其检出率更高。
1.抗体筛选和优化
针对抗体的筛选和优化，瑞孚迪提供一系列杂交瘤检测试剂盒、抗体筛选试剂盒以及toolbox，满足各种蛋白互作检测、抗体含量检测及亲和力检测的需求。
① 杂交瘤检测试剂盒（部分）
产品分类 | 产品货号 | 产品名称 | 平台 |
小鼠杂交瘤 | 64HYHISPEG | Hybridoma binding kit (6HIS antigen) | HTRF |
63ADK000CB40PEG | Hybridoma binding kit (hFc antigen) | HTRF | |
大鼠杂交瘤 | 63ADK000CB39PEG | Hybridoma binding kit (6HIS antigen) | HTRF |
② 抗体筛选试剂盒（部分）
产品分类 | 产品货号 | 产品名称 | 平台 |
抗体筛选-阻断性抗体 | AL366C | Human EGF/EGFR binding kit | Alpha |
64PD1PEG | Human PD1/PD-L1 binding assay | HTRF | |
抗体筛选-功能性抗体 | 6FTAUPEG | Tau Aggregation Kit | HTRF |
AL3132C | Human PCSK9/LDLR Binding Kit | Alpha |
③抗体含量检测试剂盒（部分）
产品分类 | 产品货号 | 产品名称 | 线性范围 | 平台 |
IgG检测 | 6FHIGPEG | HTRF Human IgG Detection Kit | 0.9 - 2000 ng/mL | HTRF |
AL529HV | AlphaLISA Mouse IgG Detection Kit | 129 - 3 000 000 pg/mL | Alpha | |
Fc检测 | 62HFCPEG | HTRF Human Fc Detection Kit | 5.5 - 4000 ng/mL | HTRF |
AL3129HV | AlphaLISA Human IgG Fc Detection Kit | 6 - 100 000 ng/mL | Alpha | |
IgG1检测 | AL3171HV | AlphaLISA Human IgG1 Detection Kit | 4.29 - 1 000 000 ng/mL | Alpha |
Kappa Light检测 | AL3023HV | AlphaLISA Human Kappa Light Chain Detection Kit | 73 - 300 000 pg/mL | Alpha |
Lambda Light检测 | 64LAMPEG | HTRF Human IgG Lambda MAb kit | 0.8 - 200 ng/mL | HTRF |
④toolbox-自建体系（部分）
瑞孚迪PPI toolbox试剂包括Eu和Tb穴状化合物以及 XL665和 D2标记的抗标签抗体、抗种属抗体和链霉亲和素。您可以根据您靶点蛋白的标签以及抗体的种属/亚型等，选择合适的供体和受体对，自己搭建合适的基于HTRF/Alpha的抗体筛选模型。
HTRF | ALPHA | ||||||||
PPI reagents | Europium | Terbium | XL665 | d2 | Donor Beads | AlphaLISA 615 | AlphaPlex (Tb)545 | AlphaPlex (Sm)645 | AlphaScreen 520-620 |
Anti-GST | 61GSTKLA | 61GSTTLA | 61GSTXLA | 61GSTDLA | - | AL110 | - | - | 6760603 |
Anti-6HIS | 61HISKLA | 61HISTLA | 61HISXLA | 61HISDLA | - | AL178 | AP178TB | AP178SM | - |
Anti-mouse lg | 61PAMKLA | 61PAMTAA | 61PAMXLA | 61PAMDAA | AS104 | AL105 | AP105TB | AP105SM | 6760606 |
Anti-human lg | 61HFCKLA | 61HFCTAA | 61HFCXLA | 61HFCDAA | - | AL103 | - | - | - |
Protein A | 61PRAKLA | - | 61PRAXLA | - | AS102 | AL101 | AP101TB | AP101SM | 6760137 |
VHH | 610VHHKLA | 610VHHTLA | - | - | AS117D | AL180C | - | - | - |
二、生物学活性检测
抗体药早期发现阶段，在体外进行生物学活性检测也是非常关键的一步，瑞孚迪基于HTRF、Alpha均相技术平台和化学方法平台，可提供细胞表面受体结合、信号通路相关指标及杀伤活性等一系列检测试剂，多维度表征抗体药的体外生物活性，为抗体药的研发、质量控制提供重要支撑。
1. FcγR和FcRn结合活性
瑞孚迪Tag-lite®是一种基于细胞的检测方法，用于测定针对FcγR和FcRn的特异性抗体结合情况，适用于ADCC活性抗体以及更长循环半衰期的抗体，还可用于评估抗体的去岩藻糖基化程度。
产品列表（部分）
货号 | 名称 | 规格 |
6FR3APAG | CD16a (FcgRIIIa, F158) cellular Kit | 100 tests |
6FRAHPAG | CD32a (FcgRIIa, H131) cellular Kit | 100 tests |
6FC64PAG | CD64 (FcgRI) cellular Kit | 100 tests |
64FCRNPET | FcRn Kit | 100 tests |
2. C1q结合活性
人C1q结合试剂盒用于检测IgG的Fc端与人C1q 蛋白的结合情况。
产品列表
产品分类 | 货号 | 名称 |
C1q结合活性 | 64C1QPET | Human C1Q Binding Kit |
3. 信号通路检测
① 第二信使检测
抗体与细胞表面受体结合后，会引发细胞内的信号转导过程，第二信使在这个过程中起着关键的传递和放大信号的作用，通过检测第二信使的水平变化，可以间接反映抗体药物的活性。
产品列表（部分）
产品货号 | 产品名称 | 平台 |
62IPAPEB | IP-One - Gq Kit | HTRF |
62AM4PEB | cAMP - Gs Dynamic Kit | HTRF |
62AM9PEB | cAMP - Gi Kit | HTRF |
6760635D | AlphaScreen cAMP Detection Kit | Alpha |
② 磷酸化蛋白检测
蛋白质磷酸化是细胞信号转导的重要环节，抗体药物作用于细胞后，常通过激活或抑制相关蛋白激酶，使蛋白质发生磷酸化修饰，从而改变蛋白质的活性、定位和功能。检测磷酸化蛋白的水平和变化情况，有助于深入了解抗体药物对细胞信号通路的影响，以及其发挥作用的具体分子机制。比如，在某些癌症治疗中，抗体药物可能通过诱导特定蛋白的磷酸化，激活细胞凋亡信号通路，促使癌细胞死亡。
产品列表（部分）
产品货号 | 产品名称 | 平台 |
64AERPEG | HTRF ADV.ERK P-T202/Y204 KIT | HTRF |
MPSU-PTAKT-M500 | SF ULTRA MULTIPX P/T-AKT (EU/TB) NF | Alpha |
64NFBPEG | HTRF NFKB P-S536 KIT | HTRF |
ALSU-PST3-A-HV | ALPHA.SF ULTRA STAT3 PY705, HV | Alpha |
③ 细胞因子检测
抗体药可通过调节免疫细胞的活性，使其分泌细胞因子来发挥作用。细胞因子是一类具有广泛生物学活性的小分子蛋白质，参与调节固有免疫和适应性免疫、血细胞生成、细胞生长等多种生理过程。检测细胞因子的分泌水平，可以评估抗体药对免疫系统的激活或调节作用，以及其在免疫治疗中的潜在效果。
产品列表（部分）
种类 | 平台 | 货号 | 种属 | 线性 (pg/mL) | LOD (pg/mL) | LOQ (pg/mL) |
IFNγ | AlphaLISA HP | AL3153C | Human only | 0.34 – 3, 000 | 0.34 | 1.31 |
IL2 | AlphaLISA HP | AL3155C | Human only | 0.18 – 300,000 | 0.18 | 0.65 |
TNFα | HTRF | 62HTNFAPEG | Human only | 29 – 2,500 | 5 | 29 |
AlphaLISA HP | AL3157C | Human only | 1.41 – 30,000 | 1.41 | 6.82 |
④ 荧光素酶报告基因检测
荧光素酶报告基因是体外研究信号通路的激活与调控的常用方法。抗体药与细胞表面受体结合后，会引发细胞内一系列信号转导通路的激活。通过构建含有荧光素酶报告基因的细胞模型，将荧光素酶基因置于待研究信号通路的关键转录因子或调控元件的下游，当抗体药作用于细胞并激活相应信号通路时，会导致荧光素酶报告基因的表达上调，进而产生可检测的荧光信号。
产品列表（部分）
产品货号 | 产品名称 |
6016719 | NEOLITE 1000ML KIT |
6066751 | STEADYLITE PLUS 100 ML KIT |
6066761 | BRITELITE PLUS 100ML KIT |
6016796 | TWINLITE GLOW 100 ASSAY KIT |
4. 细胞杀伤检测
抗体药细胞杀伤检测是评估抗体药物有效性的关键环节。它主要用于衡量抗体药物对靶细胞（如肿瘤细胞、病毒感染细胞等）的杀伤能力，这对于研究抗体药的治疗潜力、筛选优化药物候选物以及理解其作用机制等方面都具有极其重要的意义。
瑞孚迪基于特有的HTRF平台、Delfia平台和化学发光平台，针对不同的检测需求，提供多种细胞杀伤检测检测试剂。
① 人Perforin-1和Granzyme B检测
人Perforin-1和Granzyme B检测试剂盒均采用HTRF均相检测法，反应原理类似，以人Perforin-1试剂盒为例，该试剂盒含有两种特异性抗人穿孔素抗体，它们分别用Eu穴状化合物（供体）和 D2（受体）进行标记。信号强度与样本中存在的穿孔素浓度成正比。
货号 | 名称 |
63ADK100PEG | Human Perforin-1 Kit |
63ADK095PEH | Human Granzyme B Kit |
② 基于ATP的细胞活力检测
ATP广泛存在于所有活细胞中，在正常的活细胞中，ATP的含量相对稳定，当细胞受到抗体药的杀伤作用时，细胞膜完整性被破坏，细胞内的 ATP 会释放到细胞外环境中。因此，通过检测细胞培养上清或细胞裂解物中的 ATP 含量，可以反映细胞的存活状态和抗体药的细胞杀伤效果。
产品列表（部分）
产品货号 | 产品名称 |
6016731 | ATP LITE 1-STEP, 100ML |
6066736 | ATP LITE 1-STEP 3D, 10ML KIT |
③ DELFIA EuTDA细胞毒性检测检测试剂盒
该试剂盒利用瑞孚迪DELFIA® 时间分辨荧光（TRF）法，检测原理与铬释放试验相同，只不过其靶细胞负载的是一种 BATDA 配体，而非 51Cr，它不需要经过特殊改造的细胞，用于测量化学细胞毒性、细胞介导的细胞毒性以及抗体依赖性细胞毒性（ADCC）。
货号 | 名称 |
AD0116 | EUTDA CYTOTOXICITY ASSAY KIT |
三、抗体药生产和质控
1. 高产细胞株筛选
在高产细胞株筛选过程中，需要快速且大规模地对众多候选细胞株所分泌到细胞上清中的抗体含量进行测定，运用准确的高通量检测方法检测细胞上清中抗体含量，无论是对于细胞株的初筛、稳定性评估还是培养条件优化等方面，都起着不可或缺的重要作用。
瑞孚迪基于HTRF和AlphaLISA均相检测平台，可提供IgG及其亚型、Fc、VHH、轻链等一系列检测试剂，整个实验过程中无需洗板，只需“加样-孵育-读板”，2 h即可获得结果，帮您准确、快速地测定细胞上清及血清样本中的抗体含量。
抗体含量检测试剂（部分）
产品分类 | 产品货号 | 产品名称 | 线性范围 | 平台 |
IgG检测 | 6FHIGPEG | HTRF Human IgG Detection Kit | 0.9 - 2000 ng/mL | HTRF |
AL529HV | AlphaLISA Mouse IgG Detection Kit | 129 - 3 000 000 pg/mL | Alpha | |
Fc检测 | 62HFCPEG | HTRF Human Fc Detection Kit | 5.5 - 4000 ng/mL | HTRF |
AL3129HV | AlphaLISA Human IgG Fc Detection Kit | 6 - 100 000 ng/mL | Alpha | |
IgG1检测 | AL3171HV | AlphaLISA Human IgG1 Detection Kit | 4.29 - 1 000 000 ng/mL | Alpha |
Kappa Light检测 | AL3023HV | AlphaLISA Human Kappa Light Chain Detection Kit | 73 - 300 000 pg/mL | Alpha |
Lambda Light检测 | 64LAMPEG | HTRF Human IgG Lambda MAb kit | 0.8 - 200 ng/mL | HTRF |
VHH检测 | 610VHHKLA | HTRF Anti-VHH-Eu cryptate | 5000 Assay Points | HTRF |
610VHHTLA | HTRF Anti-VHH-Tb cryptate | 5000 Assay Points | HTRF | |
AL180C | Alpha Anti-VHH Acceptor Beads | 250 µg | Alpha | |
AS117D | Alpha Anti-VHH Donor Beads | 1 mg | Alpha |
2. 残留检测
质量分析作为抗体药走向商业化生产的重要关卡，对生产过程进行严格质量控制，是获得抗体药研究成功、保证患者安全的关键。国家药监局对抗体药HCP、HCD等残留的限值也做出了明确的规定。瑞孚迪为您提供完整的宿主细胞DNA和蛋白残留质控方案，通过均相检测方法，让您在精确定量的同时也能享受其带来的快速和方便。
产品列表（部分）
AlphaLISA | HTRF | |
CHO Host Cell Protein Detection | AL3176C | 64CHOPEG |
HEK Host Cell Protein Detection | AL3198C | - |
Host Cell Residual DNA Detection | AL331C | - |
四、体内动物试验
在药物研发和IND申报前，必须在临床前研究中探索药物的安全性和有效性。临床前药物研究除了体外试验外，还需要使用动物进行体内试验，体外研究一般是基于蛋白和细胞水平，而体内研究能够为药物对整个身体的影响提供依据，更好地可视化潜在的相互作用。
1. 体内药效
动物体内药效试验一般采用目标适应症的动物疾病模型，通过合理的方案设计，来评价药物的有效性，包括药物作用机制的解释，是新药研发中不可或缺的环节，通常用于支持临床试验中产品拟定用途的合理性。
① 药物作用机制研究
抗体药的作用机制较为复杂，通过体内机制研究可以详细了解药物是如何在生物体内复杂的生理环境下发挥作用的，从而深化药物作用原理，通过药物体内作用机理的研究，还可以优化药物设计和开发、预测和避免不良反应以及指导联合用药策略。
磷酸化蛋白检测是抗体药作用机制研究的重要指标之一，瑞孚迪提供全面的磷酸化蛋白检测试剂盒，几乎覆盖了所有磷酸化热门靶点，除了磷酸化蛋白检测试剂盒外，瑞孚迪还提供相应的总蛋白检测试剂盒，让您的检测结果更具客观性。
产品列表（部分）
产品货号 | 产品名称 | 平台 |
64AERPEG | HTRF ADV.ERK P-T202/Y204 KIT | HTRF |
MPSU-PTAKT-M500 | SF ULTRA MULTIPX P/T-AKT (EU/TB) NF | Alpha |
64NFBPEG | HTRF NFKB P-S536 KIT | HTRF |
ALSU-PST3-A-HV | ALPHA.SF ULTRA STAT3 PY705, HV | Alpha |
② 小动物活体成像
小动物活体成像技术主要包括生物发光（Bioluminescence）和荧光（Fluorescence）成像两种技术，瑞孚迪为您提供种类丰富的生物发光及荧光活体成像试剂，不仅适用于瑞孚迪全系列小动物活体光学成像系统， 而且适用于其他进行体外研究的细胞显微成像系统，帮助您获取从体外到体内研究的系统性实验结果。
产品详情请点击>> http://puna.021team.com/xiaodongwuhuotichengxiang/
2.安全性研究
细胞因子检测
抗体药尤其是一些具有免疫调节功能的抗体药，体内可能会引发免疫系统的过度反应，导致细胞因子释放综合征（CRS）。CRS 是一种严重的、可能危及生命的不良反应，通过监测细胞因子在体内的动态变化，可以及时发现 CRS 的发生风险。
瑞孚迪提供基于HTRF和Alpha均相检测的细胞因子检测试剂盒，用几ul的样本在2h内即可获得检测结果。
产品列表（部分）
种类 | 平台 | 货号 | 种属 | 线性 (pg/mL) | LOD (pg/mL) | LOQ (pg/mL) |
IFNγ | AlphaLISA HP | AL3153C | Human only | 0.34 – 3, 000 | 0.34 | 1.31 |
IL2 | AlphaLISA HP | AL3155C | Human only | 0.18 – 300,000 | 0.18 | 0.65 |
TNFα | HTRF | 62HTNFAPEG | Human only | 29 – 2,500 | 5 | 29 |
AlphaLISA HP | AL3157C | Human only | 1.41 – 30,000 | 1.41 | 6.82 |
3. 体内药代研究
抗体药在血清中的代谢过程直接影响其在体内的有效浓度和作用时间，从而决定了药物的治疗效果。了解药物代谢有助于确定最佳的给药剂量、频率和途径，同时也能帮助预测可能出现的药物相互作用和不良反应。
瑞孚迪可提供多种血清中抗体药浓度检测方法：
① 通用的抗体定量方式
可通过瑞孚迪HTRF和Alpha抗体定量检测试剂盒进行检测，对于血清等复杂样本的检测，更推荐使用Alpha 抗体定量试剂盒。
产品分类 | 产品货号 | 产品名称 | 线性范围 | 平台 |
IgG检测 | 6FHIGPEG | HTRF Human IgG Detection Kit | 0.9 - 2000 ng/mL | HTRF |
AL529HV | AlphaLISA Mouse IgG Detection Kit | 129 - 3 000 000 pg/mL | Alpha | |
Fc检测 | 62HFCPEG | HTRF Human Fc Detection Kit | 5.5 - 4000 ng/mL | HTRF |
AL3129HV | AlphaLISA Human IgG Fc Detection Kit | 6 - 100 000 ng/mL | Alpha | |
IgG1检测 | AL3171HV | AlphaLISA Human IgG1 Detection Kit | 4.29 - 1 000 000 ng/mL | Alpha |
Kappa Light检测 | AL3023HV | AlphaLISA Human Kappa Light Chain Detection Kit | 73 - 300 000 pg/mL | Alpha |
Lambda Light检测 | 64LAMPEG | HTRF Human IgG Lambda MAb kit | 0.8 - 200 ng/mL | HTRF |
VHH检测 | 610VHHKLA | HTRF Anti-VHH-Eu cryptate | 5000 Assay Points | |
610VHHTLA | HTRF Anti-VHH-Tb cryptate | 5000 Assay Points | ||
AL180C | Alpha Anti-VHH Acceptor Beads | 250 µg | ||
AS117D | Alpha Anti-VHH Donor Beads | 1 mg |
② 利用抗原检测血清中的抗体
采用瑞孚迪Alpha均相技术，在特异性抗原和二抗上面分别偶联带有供体和受体的微珠，当血清样本中含有特异性抗体时，会拉近供体和受体微珠的距离从而发出特异波长的光。血清中抗体含量与发光值成正比。
瑞孚迪提供抗体检测的toolbox，同时也提供抗原和抗体的标记服务。
Toolbox列表（部分）
HTRF | ALPHA | ||||||||
PPI reagents | Europium | Terbium | XL665 | d2 | Donor Beads | AlphaLISA 615 | AlphaPlex (Tb)545 | AlphaPlex (Sm)645 | AlphaScreen 520-620 |
Anti-GST | 61GSTKLA | 61GSTTLA | 61GSTXLA | 61GSTDLA | - | AL110 | - | - | 6760603 |
Anti-6HIS | 61HISKLA | 61HISTLA | 61HISXLA | 61HISDLA | - | AL178 | AP178TB | AP178SM | - |
Anti-mouse lg | 61PAMKLA | 61PAMTAA | 61PAMXLA | 61PAMDAA | AS104 | AL105 | AP105TB | AP105SM | 6760606 |
Anti-human lg | 61HFCKLA | 61HFCTAA | 61HFCXLA | 61HFCDAA | - | AL103 | - | - | - |
Protein A | 61PRAKLA | - | 61PRAXLA | - | AS102 | AL101 | AP101TB | AP101SM | 6760137 |
VHH | 610VHHKLA | 610VHHTLA | - | - | AS117D | AL180C | - | - | - |
- 抗体药物研发
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