HTRF AKT1 P-S473 KIT - 50K PTS

概述

磷酸化AKT1（Ser473）试剂盒旨在对丝氨酸473位磷酸化的AKT1调控进行可靠定量。AKT也被称为蛋白激酶B（PKB），是一种癌基因，在控制细胞凋亡、细胞增殖、转录、细胞迁移和葡萄糖代谢中发挥关键作用。特别是AKT1，在细胞存活中起着至关重要的作用，因此在癌症研究中具有重要应用。工作原理

磷酸化AKT1（Ser473）检测原理 磷酸化AKT1（Ser473）检测用于测量丝氨酸473位磷酸化的AKT1。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化AKT1（Ser473）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态识别该蛋白质。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生FRET信号。该信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的磷酸化状态。 磷酸化AKT1（Ser473）双板检测方案 双板方案包括：先在96孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至384孔小体积检测板，再加入磷酸化AKT1（Ser473）HTRF检测试剂。该方案可监测细胞的活力和汇合度。 HTRF总BRD2检测的双板方案 磷酸化AKT1（Ser473）单板检测方案 使用HTRF试剂检测磷酸化AKT1（Ser473）可在单个培养板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的HTRF质量。 HTRF总BRD2检测的单板方案 检测验证 磷酸化AKT1检测：封闭肽的抑制作用 用人类IGF-1刺激SH-SY5Y细胞15分钟。刺激后，移除培养基，用1X裂解缓冲液在室温下轻轻振荡30分钟裂解细胞。将14µL裂解物转移至384孔小体积白色微孔板中，加入2µL不同浓度的AKT1特异性封闭肽，然后再加入4µL HTRF磷酸化AKT1（Ser473）检测试剂。室温孵育过夜后记录HTRF信号。 简化通路 磷酸化AKT1检测：封闭肽的抑制作用 用人类IGF-1刺激SH-SY5Y细胞15分钟。刺激后，移除培养基，用1X裂解缓冲液在室温下轻轻振荡30分钟裂解细胞。将14µL裂解物转移至384孔小体积白色微孔板中，加入2µL不同浓度的AKT1特异性封闭肽，然后再加入4µL HTRF磷酸化AKT1（Ser473）检测试剂。室温孵育过夜后记录HTRF信号。规格参数

其他规格 - 应用领域：细胞信号传导 - 品牌：HTRF - 检测方式：HTRF - 分子修饰：磷酸化 - 产品类别：试剂盒 - 样品体积：16µL - 运输条件：干冰运输 - 靶标类别：磷酸化蛋白 - 靶标物种：人 - 技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET） - 治疗领域：代谢/糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎/纤维化 - 单位规格：50,000个检测点