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HTRF STAT1 TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

总 STAT1 检测可测量细胞裂解物中 STAT1 的内源性水平。STAT1 作为一种重要的转录激活因子，该检测可作为肿瘤学、病毒学和炎症研究中 JAK 抑制剂的读数指标。此检测还可用于将磷酸化 STAT1 的量相对于总 STAT1 进行归一化处理。

工作原理

总 STAT1 检测原理

总 STAT1 检测用于定量细胞裂解物中 STAT1 的表达水平。与蛋白质印迹法不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 STAT1 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 STAT1 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白质的表达水平。

总 STAT1 双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再加入总 STAT1 HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

总 STAT1 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 STAT1 可在单个培养板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

检测验证

基于人 Jurkat 细胞的总 STAT1 细胞检测：HTRF 检测与蛋白质印迹法的比较

将 HeLa 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 48 小时。然后用 IFNα 刺激细胞 20 分钟。移除培养基后，加入 3mL 补充裂解缓冲液，在室温下裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性组分。用补充裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液分别通过蛋白质印迹法（Western-blot）和 HTRF 进行平行分析。对于每种测试的细胞密度，荧光比率与蛋白质印迹条带强度高度匹配，证明 HTRF 作为测量总 STAT1 的分析技术具有可靠性。

利用 HTRF 总 STAT1 检测验证小鼠和人细胞中 STAT1 的磷酸化状态

用不同浓度的 IFNα 刺激 NIH 3T3 细胞和 HeLa 细胞（200,000 个细胞 / 96 孔板）20 分钟后，加入 50 µL 补充裂解缓冲液裂解细胞，在室温下轻轻振荡孵育 30 分钟。对于磷酸化 STAT1 检测（蓝色曲线）：将 16 µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，随后加入 4 µL HTRF 磷酸化 STAT1 检测试剂。对于总 STAT1 检测（红色曲线）：将 16 µL 裂解物转移至 384 孔低体积白色微孔板中，随后加入 4 µL HTRF 总 STAT1 检测试剂。室温孵育过夜后记录 HTRF 信号。结果显示，与 NIH3T3 细胞相比，HeLa 细胞对 IFNα 的敏感性更高。

简化通路

JAK/STAT 通路中的转录激活因子 STAT1

STAT1 是 JAK/STAT 通路中一种重要的转录激活因子，受 I 型干扰素、生长因子或趋化因子激活。刺激后，磷酸化的 STAT1 二聚体与干扰素刺激基因因子 3 复合物结合，随后 STAT1 蛋白转运至细胞核内，激活与细胞存活、活力或病原体应答相关的基因转录。在 IFNγ 作用下，STAT1 形成同源二聚体或与 STAT3 形成异源二聚体，结合到 γ 干扰素激活序列（GAS）启动子元件上。在 IFNα 或 IFNβ 作用下，STAT1 与 STAT2 形成异源二聚体，结合到干扰素刺激应答元件（ISRE）上。

规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰类型：总蛋白（Total）
产品类别：试剂盒（Kit）
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷蛋白
靶标物种：人、小鼠
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：传染病、神经科学、肿瘤学与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：63ADK096PEY

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