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HTRF (H) CGAS TOTAL KIT - 50K PTS

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品牌： Revvity

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概述

在病原体感染以及双链 DNA（dsDNA）与细胞质传感器 cGAS 结合后，STING 蛋白会被 TBK1 磷酸化，使其能够与 IRF3 结合，进而诱导 Ⅰ 型干扰素的产生。随后，STING 通路会通过 STING 的降解（涉及自噬过程）而被关闭。

在肿瘤免疫学领域，激活 STING 通路在临床前模型中已显示出良好的抗肿瘤效果，因此这一通路成为治疗人类癌症的一种潜在治疗策略。

工作原理
总 cGAS 检测原理
总 cGAS 检测可对细胞裂解物中 cGAS 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 cGAS 检测使用两种标记抗体，一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 cGAS 时，加入这些偶联抗体后，供体荧光团与受体荧光团会靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样品中目标蛋白的浓度直接成正比，且无需洗涤步骤即可评估蛋白的表达水平。

人总 cGAS 检测试剂盒

总 cGAS 双板检测方案
双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，然后进行裂解，再将裂解物转移至小体积检测板（HTRF 384-lv 或 96-lv 板）中，最后加入 HTRF 总 cGAS 检测试剂。该方案能够监测细胞的活力和汇合度。

人总 cGAS 检测试剂盒

总 ATG16L1 单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测总 cGAS 可在同一板中完成细胞培养、刺激和裂解操作，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

人总 cGAS 检测试剂盒

检测验证
siRNA 处理的 THP-1 细胞中总 cGAS 检测的验证
将 THP-1 细胞以每孔 100,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中，每孔加入 90µl 完全培养基。对于脂质体处理的样品，加入 10µl 含 1% 脂质体的培养基。对于 siRNA 处理的细胞，加入 10µl 脂质体 RNAiMax 与 cGAS siRNA 的混合液。随后将细胞在 37°C、5% CO₂条件下分别孵育 48 小时和 72 小时。

孵育结束后，加入 33.3µL 4 倍浓度的补充裂解缓冲液 #1，在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞，然后取 16µL 裂解物转移至小体积白色微孔板中，再加入 2µL HTRF d2 检测试剂和 2µL HTRF Eu-K 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

人总 cGAS 检测试剂盒

siRNA 处理的 HeLa 细胞中总 cGAS 检测的验证
将 HeLa 细胞以每孔 50,000 个细胞的密度接种到 96 孔板中，每孔加入 90µl 完全培养基。对于脂质体处理的样品，加入 10µl 含 1% 脂质体的培养基。对于 siRNA 处理的细胞，加入 10µl 脂质体 RNAiMax 与 cGAS siRNA 的混合液。随后将细胞在 37°C、5% CO₂条件下分别孵育 24 小时和 48 小时。

孵育结束后，加入 90µL 1 倍浓度的补充裂解缓冲液 #1，在室温下轻轻振荡 30 分钟以裂解细胞，然后取 16µL 裂解物转移至小体积白色微孔板中，再加入 2µL HTRF d2 检测试剂和 2µL HTRF Eu-K 检测试剂。孵育过夜后记录 HTRF 信号。

人总 cGAS 检测试剂盒

规格参数

其他规格
应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：裂解缓冲液 1
分子修饰：总（蛋白）
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白
目标物种：人
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
单位规格：500 次检测

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货号：64CGASTPEY

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