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HTRF GSK3 ALPHA P-S21 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化糖原合成酶激酶 3α（GSK3α，Ser21）检测旨在对 Ser21 位点磷酸化状态下的 GSK3α 调控进行可靠定量，可作为主要通路的通用读数指标。GSK3 参与 PI3K/AKT 信号通路、Wnt/β- 连环蛋白通路、 Hedgehog 通路、Notch 通路、糖原合成以及细胞骨架聚合，这些过程控制着蛋白质合成、细胞增殖、迁移、炎症、免疫反应、葡萄糖调节和细胞凋亡。

工作原理

磷酸化 GSK3α（Ser21）检测原理

磷酸化 GSK3α（Ser21）检测用于测量在 Ser21 位点发生磷酸化的 GSK3α。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。磷酸化 GSK3α（Ser21）检测使用两种标记抗体：一种带有供体荧光团，另一种带有受体荧光团。第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生 FRET 信号。该信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，且能在无需洗涤的检测形式下评估蛋白质的磷酸化状态。

磷酸化 GSK3α 细胞检测试剂盒

磷酸化 GSK3α（Ser21）双板检测方案

双板方案包括：先在 96 孔板中培养细胞，然后裂解细胞，将裂解物转移至 384 孔小体积检测板，之后再加入磷酸化 GSK3α（Ser21）HTRF 检测试剂。此方案能够监测细胞的活力和汇合度。

磷酸化 GSK3α 细胞检测试剂盒

磷酸化 GSK3α（Ser21）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 GSK3α（Ser21）可在单个培养板中完成，该培养板用于细胞培养、刺激和裂解。无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现小型化，同时保持稳定的 HTRF 质量。

磷酸化 GSK3α 细胞检测试剂盒

检测验证

使用磷酸化 GSK3α 和总 GSK3α 检测对比 HTRF 检测与蛋白质印迹法

人 MCF-7 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养至 80% 汇合度。用 1.72 µM 胰岛素刺激 30 分钟后，弃去细胞培养基，用 3 mL 补充的裂解缓冲液在室温下裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性组分。用补充的裂解缓冲液对细胞裂解物进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 进行平行分析。使用 HTRF 磷酸化 GSK3α（Ser21）和总 GSK3α 细胞检测时，仅需 1500 个细胞即可检测到最小信号，而蛋白质印迹法则需要 12500 个细胞才能产生信号。HTRF 细胞检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 4 倍。

磷酸化 GSK3α 细胞检测试剂盒

使用磷酸化 GSK3α 检测验证 UCN-01 对 GSK3 磷酸化的抑制作用

将 100,000 个人 MCF-7 细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用不同浓度的 UCN-01 孵育 2 小时后，用 1.72 µM 胰岛素刺激 30 分钟。随后移除培养基，用 50 µL 裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 磷酸化 GSK3α（Ser21）检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

磷酸化 GSK3α 细胞检测试剂盒

使用磷酸化 GSK3α（Ser21）细胞检测验证胰岛素对 MCF-7 细胞的剂量反应

将 100,000 个人 MCF-7 细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用不同浓度的胰岛素孵育 30 分钟后，移除培养基，用 50 µL 裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 磷酸化 GSK3α（Ser21）检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

磷酸化 GSK3α 细胞检测试剂盒

HTRF 磷酸化 GSK3α（Ser21）细胞检测与不同细胞系的兼容性

将 100,000 或 200,000 个不同细胞系的细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用 1 µg/mL 的 UCN-01（或不加）孵育 2 小时后，用 1.72 µM 胰岛素刺激 30 分钟。移除培养基，用 50 µL 裂解缓冲液在室温下轻轻振荡裂解细胞 30 分钟。将 16 µL 裂解物转移至 384 孔小体积白色微孔板中，并加入 4 µL HTRF 磷酸化 GSK3α（Ser21）检测试剂。过夜孵育后记录 HTRF 信号。

磷酸化 GSK3α 细胞检测试剂盒

简化通路

GSK3α 简化通路

GSK3α 在众多核心细胞内信号通路中发挥作用，调控从增殖、免疫反应到葡萄糖调节和细胞凋亡等重要细胞过程。GSK3 激酶的磷酸化会抑制下游靶标的活性。GSK3 的调控还与其细胞定位和蛋白质复合物的形成有关。在胰岛素通路中，胰岛素激活 PI3K，后者磷酸化 AKT。继而，激活的 AKT 将 GSK3α 的 Ser21 位点和 GSK3β 的 Ser9 位点磷酸化，导致 GSK-3 失活，并通过去磷酸化激活糖原合成酶。去磷酸化的 GSK3 会使糖原合成酶失活，而糖原合成酶的作用是将葡萄糖转化为糖原。因此，GSK3 被认为是多种疾病研究中的潜在多功能靶点。

磷酸化 GSK3α 细胞检测试剂盒

规格

其他规格

应用：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：磷酸化
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白质
目标物种：人、小鼠
技术：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：传染病、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64GPAPEY

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