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HTRF GSK3 BETA TOTAL KIT - 50K PTS

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概述

总 GSK3β 细胞检测可作为磷酸化 GSK3β 试剂盒的归一化检测方法，非常适合代谢研究。GSK3 参与 PI3K/AKT 信号通路、Wnt/β- 连环蛋白通路、 Hedgehog 通路、Notch 通路、糖原合成以及细胞骨架聚合，这些过程调控着蛋白质合成、细胞增殖、迁移、炎症反应、免疫应答、葡萄糖调节和细胞凋亡。

工作原理

总 GSK3β 检测原理

总 GSK3β 检测用于定量细胞裂解物中 GSK3β 的表达水平。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 GSK3β 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体都对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 GSK3β 时，添加这些偶联物会使供体荧光团与受体荧光团接近，从而产生 FRET（荧光共振能量转移）信号。信号强度与样品中蛋白质的浓度直接成正比，且该检测采用无需洗涤的形式，为评估蛋白质表达提供了便利手段。

总 GSK3β 双板检测方案

双板方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再添加总 GSK3β HTRF 检测试剂。该方案能够监测细胞活力和汇合度。

总 GSK3β 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 GSK3β 可在同一板中完成，该板可用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能够实现微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

HTRF 检测与蛋白质印迹法在磷酸化 GSK3β 和总 GSK3β 检测中的比较

人 MCF-7 细胞在 T175 培养瓶中、37°C、5% CO₂条件下培养至 80% 汇合度。用 1.72 µM 胰岛素刺激 30 分钟后，弃去细胞培养液，加入 3 mL 补充的裂解缓冲液，在室温下裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性组分。将细胞裂解物在补充的裂解缓冲液中进行系列稀释，每孔加入 16 µL 各稀释液，分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 法进行平行分析。使用 HTRF 磷酸化 GSK3β（Ser9）和总 GSK3β 细胞检测时，仅需 1500 个细胞即可实现最小信号检测，而蛋白质印迹法则需要 12500 个细胞才能产生信号。HTRF 细胞检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 4 倍。

简化通路

GSK3 简化通路

GSK3 在众多核心细胞内信号通路中发挥作用，调控从增殖、免疫应答到葡萄糖调节和细胞凋亡等重要细胞过程。GSK3 激酶的磷酸化会抑制下游靶标的活性。GSK3 的调控还涉及细胞定位和蛋白质复合物的形成。在胰岛素通路中，胰岛素激活 PI3K，PI3K 进而磷酸化 AKT。激活的 AKT 反过来使 GSK3α 的 Ser21 位点和 GSK3β 的 Ser9 位点磷酸化，导致 GSK-3 失活，并通过去磷酸化作用激活糖原合酶。去磷酸化的 GSK3 会使糖原合酶失活，而糖原合酶的作用是将葡萄糖转化为糖原。因此，GSK3 被认为是多种疾病研究中具有潜力的多功能靶点。

规格参数

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
分子修饰：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
目标类别：磷酸化蛋白
目标物种：人、小鼠
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：传染病、代谢 / 糖尿病、非酒精性脂肪性肝炎 / 肝纤维化、肿瘤与炎症
单位规格：50,000 个检测点

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货号：64GTBPEY

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