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HTRF HER3 P-Y1289 KIT - 50K PTS

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概述

磷酸化 HER3（Tyr1289）检测旨在对 HER3（Erbb3）在 Tyr1289 位点磷酸化时的表达调控进行可靠定量，该位点的磷酸化是多种癌症病理的指示标志。HER3（即人表皮生长因子受体 3/ErbB3）的过表达被视为人类乳腺癌预后不良的指标。HER3 与 HER2 的异源二聚化会增加乳腺癌的侵袭性。研究还发现，HER3 与前列腺癌、胃癌、结肠癌及其他癌症相关，这使其成为抗癌治疗的关键靶点。

工作原理

磷酸化 HER3（Tyr1289）检测原理

磷酸化 HER3（Tyr1289）检测用于测量在 Tyr1289 位点发生磷酸化的 HER3。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需凝胶、电泳或转膜步骤。此检测采用两种标记抗体：一种标记供体荧光团，另一种标记受体荧光团。第一种抗体特异性结合蛋白质上的磷酸化基序，第二种抗体则识别该蛋白质，且不受其磷酸化状态影响。蛋白质磷酸化会促使形成包含两种标记抗体的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团靠近，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中磷酸化蛋白质的浓度直接相关，且该检测采用 “无需洗涤” 的格式，为评估蛋白质磷酸化状态提供了便捷方式。

磷酸化 HER3 细胞检测试剂盒

磷酸化 HER3（Tyr1289）双板检测方案
双板方案的步骤为：先在 96 孔板中培养细胞，裂解后将裂解液转移至 384 孔小体积检测板，再加入磷酸化 HER3（Tyr1289）HTRF 检测试剂。该方案可用于监测细胞活力和汇合度。
磷酸化 HER3（Tyr1289）单板检测方案
使用 HTRF 试剂检测磷酸化 HER3（Tyr1289）可在同一板中完成细胞培养、刺激和裂解步骤，无需洗涤。这种为高通量筛选（HTS）设计的方案能实现检测微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

检测验证

HTRF 磷酸化 HER3 检测与蛋白质印迹法的比较

乳腺癌细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 48 小时，随后用 100 nM HRG Beta1 刺激 10 分钟。移除培养基后，用 3 mL 补充裂解缓冲液在室温下裂解细胞 30 分钟，离心 10 分钟后收集可溶性组分。将细胞裂解液用补充裂解缓冲液进行系列稀释，取 16 µL 各稀释液，分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 法进行平行分析。结果显示，使用 HTRF 磷酸化 HER3（Tyr1289）检测时，仅需 5,000 个细胞即可检测到最低信号，而蛋白质印迹法则需要 80,000 个细胞才能产生信号。因此，HTRF 磷酸化 HER3 检测的灵敏度至少是蛋白质印迹法的 16 倍。

多种乳腺腺癌细株中 HER3 磷酸化的调控

将 100,000 个人重组 HER2/HER3、MCF-7、SK-BR-3 乳腺癌细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。用不同浓度的 HRG Beta3 孵育 10 分钟后，移除培养基，在室温下用 50 µL 裂解缓冲液温和振荡裂解细胞 30 分钟。取 16 µL 裂解液转移至 384 孔白色小体积微孔板中，加入 4 µL HTRF 磷酸化 HER3 检测试剂，孵育过夜后记录 HTRF 信号。

酪氨酸激酶抑制剂和治疗性抗体对 HER3 磷酸化的抑制作用

将 100,000 个细胞接种到 96 孔板中，在 37°C、5% CO₂条件下孵育 24 小时。先用不同浓度的抑制剂预处理细胞，随后在 37°C、5% CO₂条件下用 100 nM HRG Beta1 刺激（或不刺激）细胞。完成上述步骤后，移除培养基，在室温下用 50 µL 裂解缓冲液温和振荡裂解细胞 30 分钟。检测时，取 16 µL 裂解液转移至 384 孔白色小体积微孔板中，加入 4 µL HTRF 磷酸化 HER3 检测试剂以检测磷酸化 HER3，同时加入 4 µL HTRF 总 HER3 检测试剂以检测总蛋白，孵育过夜后记录 HTRF 信号。

酪氨酸激酶抑制剂拉帕替尼（Lapatinib）对细胞内 HER3 磷酸化的抑制作用

人乳腺癌细胞和 SKBR3 细胞先用不同浓度的酪氨酸激酶抑制剂拉帕替尼预处理 30 分钟，再用 100 nM HRG Beta1 刺激 10 分钟。

单克隆抗体对磷酸化 HER3 的抑制作用

人乳腺癌 BXPC3 细胞先用不同浓度的单克隆抗体 X（mAb-X）或单克隆抗体 Y（mAb-Y）预处理 30 分钟，再用 100 nM HRG Beta1 刺激 10 分钟。两种单克隆抗体均由法国蒙彼利埃 IRCM 的 Thierry Chardès 博士提供。

简化通路

HER3 表皮生长因子信号通路

HER3 是一种受体酪氨酸激酶，属于表皮生长因子受体（ErbB）家族。它位于细胞表面，是表皮生长因子受体（EGFR）家族中唯一尚未发现配体的成员。HER3 受体激活后会诱导其自身在 Tyr1289 位点发生磷酸化，这为多种衔接蛋白、激酶和磷酸酶提供了结合位点，进而激活下游多个信号转导通路。HER3/ErbB 受体调控多种生物学过程，如细胞增殖、分化、存活、黏附、迁移和血管生成。HER3 的过度激活与癌症相关，使其成为抗癌治疗的关键靶点。此外，HER3 与 HER2 的异源二聚化会增强癌症的侵袭性。

规格参数

其他规格	详情
应用领域	细胞信号传导
品牌	HTRF
检测方式	HTRF
分子修饰	磷酸化
产品类别	试剂盒
样品体积	16 µL
运输条件	干冰运输
目标类别	磷酸化蛋白
目标物种	人类
技术原理	时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域	肿瘤学与炎症
单位规格	50,000 个检测点

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货号：64HR3PEY

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