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HTRF MEK1 TOTAL KIT - 10K PTS

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品牌： Revvity

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概述

HTRF 总 MEK1 检测试剂盒旨在定量检测总 MEK1（包括磷酸化和非磷酸化形式），以校准 MEK1 的磷酸化状态。该试剂盒是研究 MAPK/ERK 通路中 RAS-RAF-MEK 级联反应的理想工具。MEK1 是一种双特异性丝裂原活化蛋白激酶，经 RAF 磷酸化后，负责磷酸化 ERK——ERK 是细胞增殖、存活和分化通路中最重要的信号节点及蛋白激酶之一。

工作原理

总 MEK1 检测原理

总 MEK1 检测可对细胞裂解物中 MEK1 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全板基检测，无需凝胶、电泳或转膜步骤。总 MEK1 检测使用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对该蛋白上的特定表位具有高度特异性。当细胞提取物中存在 MEK1 时，添加这些偶联抗体后，供体荧光团与受体荧光团会近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。信号强度与样品中目标蛋白的浓度直接成正比，且该检测采用 “无需洗涤” 的格式，为评估蛋白表达提供了便捷手段。

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总 MEK1 双板检测方案

双板方案流程为：先在 96 孔板中培养细胞，待裂解后将裂解物转移至 384 孔低体积检测板，再添加总 MEK1 HTRF 检测试剂。该方案可对细胞活力和汇合度进行监测。

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总 MEK1 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 MEK1 可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激和裂解，无需洗涤步骤。此高通量筛选（HTS）设计方案支持实验微型化，同时保持稳定的 HTRF 检测质量。

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检测验证

总 MEK1 检测在多种细胞系中的验证

将人源细胞（HeLa、A431、HEK293、Jurkat）、鼠源细胞（NIH 3T3）和仓鼠细胞（CHO-K1）在 T175 培养瓶中于 37°C、5% CO₂条件下培养 2 天。移除细胞培养液后，加入 3mL 补充的 3 号裂解缓冲液，孵育 45 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性上清液，取 16µL 细胞裂解物用于检测总 MEK1。其他物种的细胞系尚未经过测试，因此需逐例评估。

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总 MEK1 检测用于监测 MEK1 的磷酸化状态

采用磷酸化 MEK1（Ser218/222）检测和总 MEK1 检测的双板方案，用 EGF 激活 HeLa 细胞（100,000 个细胞 / 孔）5 分钟。结果显示，EGF 刺激后 MEK1 磷酸化水平呈剂量依赖性增加，而 MEK1 的表达水平保持恒定。

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规格参数

其他规格

应用领域：细胞信号传导
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
兼容裂解缓冲液：1 号裂解缓冲液
分子修饰类型：总蛋白
产品类别：试剂盒
样品体积：16 µL
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白
靶标物种：人
技术原理：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：
- 心血管疾病
- 神经科学
- 肿瘤学与炎症
单位规格：10,000 个检测点

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货号：64NE1PEH

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