当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF PDGFR BETA P-Y751 KIT - 10K PTS

HTRF PDGFR BETA P-Y751 KIT - 10K PTS

分享给好友

rvty_ls_sds_64PDGPEH_US rvty_ls_sds_64PDGPEH_UK rvty_ls_sds_64PDGPEH_SPA rvty_ls_sds_64PDGPEH_ITA rvty_ls_sds_64PDGPEH_ELL rvty_ls_sds_64PDGPEH_DEU rvty_ls_sds_64PDGPEH_FRA

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

磷酸化血小板衍生生长因子受体 β（PDGFRβ，Tyr751）检测可对酪氨酸 751（Tyr751）位点磷酸化的血小板衍生生长因子受体 β（PDGFRβ）的表达变化进行定量检测。PDGFRβ 可通过 PI3K/AKT 通路和 Ras/Raf MAPK 通路传递信号并实现通路间交叉对话。这种细胞表面酪氨酸激酶受体能与特定生长因子结合，进而激活 MAPK 通路，调控细胞增殖、细胞分化及血管生成过程。PDGFRβ 激活后会形成二聚体并发生磷酸化，因此磷酸化 PDGFRβ 检测是肿瘤学研究中的重要工具。

工作原理

磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）检测原理

磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）检测可特异性检测 Tyr751 位点磷酸化的 PDGFRβ。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测完全基于微孔板进行，无需使用凝胶、无需开展电泳或转膜操作。该检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。

phospho-how-it-works-phospho-pdgfrbeta-tyr751-assay-principle（图示：磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）检测原理）

其中，第一种抗体经筛选可特异性结合蛋白上的磷酸化基序，第二种抗体则能识别该蛋白（不受蛋白磷酸化状态影响）。当蛋白发生磷酸化时，会形成由两种标记抗体共同参与的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样本中磷酸化蛋白的浓度直接成正比，且在免清洗检测模式下，可用于评估蛋白的磷酸化状态。

磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行裂解；将裂解液转移至 384 孔小体积检测板后，加入磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）HTRF 检测试剂。该方案可实现对细胞存活率和融合度的监测。

phospho-pdgfrbeta-tyr751-2-plate-assay-protocol（图示：磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）双板检测方案）

磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）时，可在同一块用于细胞培养、刺激和裂解的微孔板中完成检测，无需清洗步骤。该方案专为高通量筛选（HTS）设计，能在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

phospho-pdgfrbeta-tyr751-1-plate-assay-protocol（图示：磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）单板检测方案）

检测验证

经 PDGF 刺激的肝星状细胞 LX2 检测

采用人源 PDGF 诱导人肝星状细胞 LX2 中 PDGFRβ 的磷酸化。将不同细胞密度的 LX2 细胞用不同浓度的人源 PDGF 刺激 5 分钟，随后用 50 微升（µL）补充后的裂解缓冲液裂解细胞。取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，再加入 4 微升磷酸化 PDGFRβ HTRF 检测试剂，孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。结果显示，磷酸化 PDGFRβ 的信号强度与细胞密度呈正相关。

assay-validation-pdgfr-beta-phospho-y751-1（图示：磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）检测验证 1）

小鼠 C2C12 细胞中 PDGFRβ 磷酸化动力学检测

采用人源 PDGF 诱导小鼠 C2C12 细胞中 PDGFRβ 的磷酸化。将 C2C12 细胞以每孔 50,000 个细胞的密度接种，用不同浓度的人源 PDGF 在不同时间点刺激细胞，随后用 50 微升补充后的裂解缓冲液裂解细胞。取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，再加入 4 微升磷酸化 PDGFRβ HTRF 检测试剂，孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。结果显示，仅需数分钟的短时间优化刺激，即可诱导受体发生磷酸化。

assay-validation-pdgfr-beta-phospho-y751-2（图示：磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）检测验证 2）

磷酸化 PDGFRβ 检测对不同细胞系的兼容性验证

采用人源 PDGF 分别诱导小鼠 C2C12 细胞、小鼠 NIH 3T3 细胞及人肝星状细胞 LX2 中 PDGFRβ 的磷酸化。将三种细胞均以每孔 100,000 个细胞的密度接种，用 10ng/mL 的人源 PDGF 刺激 5 分钟，随后用 50 微升补充后的裂解缓冲液裂解细胞。取 16 微升裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，再加入 4 微升磷酸化 PDGFRβ HTRF 检测试剂，孵育 2 小时后记录 HTRF 信号。

assay-validation-pdgfr-beta-phospho-y751-3（图示：磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）检测验证 3）

磷酸化 PDGFRβ 细胞检测：HTRF 法与蛋白质印迹法比较

将 C2C12 细胞在 T175 培养瓶中于 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下培养 48 小时，用 PDGF 刺激 5 分钟后移除培养基，加入 3 毫升补充后的裂解缓冲液，在室温下裂解细胞 30 分钟。离心 10 分钟后收集可溶性组分，用补充后的裂解缓冲液对细胞裂解液进行系列稀释，取 16 微升各稀释度裂解液，分别通过蛋白质印迹法和 HTRF 法进行平行检测分析。结果显示：使用 HTRF 磷酸化 PDGFRβ 检测时，仅需少于 1250 个细胞即可检测到最低信号；而蛋白质印迹法需 20,000 个细胞才能检测到信号，表明 HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的 16 倍。

assay-validation-pdgfr-beta-phospho-y751-4（图示：磷酸化 PDGFRβ（Tyr751）检测验证 4）

简化通路

磷酸化 PDGFRβ 简化通路

血小板衍生生长因子受体（PDGFR）是一种跨膜蛋白，具有胞内酪氨酸激酶结构域。PDGFRβ 包含两个不同的多肽亚基（α 亚基和 β 亚基），且两个亚基均具有酪氨酸激酶活性。配体结合会诱导受体形成二聚体并发生自身磷酸化，进而激活 AKT/PI3K 通路和 MEK/ERK 通路，这些通路共同调控细胞存活、增殖、生长及分化过程。

phospho-pathway-pdgfrb-64pdgpeg（图示：磷酸化 PDGFRβ 简化通路）

规格参数

其他规格参数

应用领域（Application）：细胞信号通路研究（Cell Signaling）
品牌（Brand）：HTRF
检测方式（Detection Modality）：HTRF
裂解缓冲液兼容性（Lysis Buffer Compatibility）：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液、3 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰类型（Molecular Modification）：磷酸化（Phosphorylation）
产品类别（Product Group）：试剂盒（Kit）
样本体积（Sample Volume）：16 微升（µL）
运输条件（Shipping Conditions）：干冰运输（Shipped in Dry Ice）
靶点类别（Target Class）：磷酸化蛋白（Phosphoproteins）
靶点物种（Target Species）：人（Human）、小鼠（Mouse）
技术平台（Technology）：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域（Therapeutic Area）：心血管疾病（Cardiovascular）、感染性疾病（Infectious Diseases）、代谢 / 糖尿病（Metabolism/Diabetes）、非酒精性脂肪性肝炎 / 纤维化（NASH/Fibrosis）、肿瘤学与炎症（Oncology & Inflammation）、罕见病（Rare Diseases）
单位规格（Unit Size）：10,000 次检测（10,000 assay points）

没有数据

货号：64PDGPEH

一键复制

参考价格 ¥ 172916.60

产品规格

请咨询￥172916.60

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价