当前位置：首页 > 产品中心 > Revvity 均相检测试剂 > Phosphoproteins > HTRF PLCG2 TOTAL KIT - 500 PTS

HTRF PLCG2 TOTAL KIT - 500 PTS

分享给好友

rvty_ls_sds_64PLCG2TPEG_US rvty_ls_sds_64PLCG2TPEG_UK rvty_ls_sds_64PLCG2TPEG_SPA rvty_ls_sds_64PLCG2TPEG_ITA rvty_ls_sds_64PLCG2TPEG_ELL rvty_ls_sds_64PLCG2TPEG_DEU rvty_ls_sds_64PLCG2TPEG_FRA

收藏咨询

品牌： Revvity

产品详情
相关解决方案
相关资源
相关视频
相关问答

概述

这款基于细胞的均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂盒可便捷、准确地检测磷脂酶 Cγ2（PLCγ2）蛋白。

磷脂酶 Cγ2（PLCγ2）是一种磷酸肌醇特异性磷脂酶，能够生成第二信使，在信号转导中发挥关键作用，尤其在造血细胞中（如 B 细胞、肥大细胞、巨噬细胞、自然杀伤细胞和血小板）。当 B 细胞抗原受体（BCR）、Fc 受体（FcRs）等不同受体受到刺激时，PLCγ2 会与多种衔接蛋白相互作用，并被细胞内酪氨酸激酶磷酸化。磷酸化发生在多个位点，其中之一是酪氨酸 1217（Tyr1217）。

PLCγ2 与多种疾病相关，如自身免疫性疾病、炎症性疾病、癌症中的耐药性以及神经退行性疾病。

工作原理

总 PLCγ2（Total-PLCγ2）检测原理

总 PLCγ2 检测可对细胞裂解液中 PLCγ2 的表达水平进行定量分析。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全微孔板检测模式，无需使用凝胶、进行电泳或转膜操作。总 PLCγ2 检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。两种抗体均对 PLCγ2 蛋白上的特定表位具有高特异性。当细胞提取物中存在 PLCγ2 时，加入上述偶联抗体后，供体荧光团与受体荧光团会近距离接触，进而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样本中 PLCγ2 蛋白的浓度直接成正比，且可通过 “免洗涤” 检测模式评估该蛋白的表达水平。

phospho-how-it-works-total-plcgamma2-assay-principle（图示：总 PLCγ2 检测原理）

总 PLCγ2 双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行裂解；将裂解液转移至 384 孔小体积检测板后，加入总 PLCγ2 HTRF 检测试剂。该方案可实现对细胞存活率和融合度的监测。

phospho-how-it-works-total-plcgamma2-2-plate-assay-protocol（图示：总 PLCγ2 双板检测方案）

总 PLCγ2 单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测总 PLCγ2 时，可在同一块用于细胞培养、刺激和裂解的微孔板中完成检测，无需洗涤步骤。该方案专为高通量筛选（HTS）设计，能在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

phospho-how-it-works-total-plcgamma2-1-plate-assay-protocol（图示：总 PLCγ2 单板检测方案）

检测验证

抗 IgM 抗体刺激 Ramos B 细胞后 PLCγ2 的激活检测

将人 B 细胞淋巴瘤 Ramos 细胞系以每孔 40 万个细胞的密度接种到半区 96 孔培养处理板中，每孔加入 25 微升无胎牛血清（FBS）培养基。在 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 3 小时后，向每孔加入 5 微升浓度递增的抗人 IgM 抗体刺激细胞 5 分钟，随后加入 10 微升补充后的 4 号裂解缓冲液（4 倍浓度），在室温下轻柔振荡裂解 30 分钟。检测阶段，取 16 微升细胞裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 4 微升磷酸化 PLCγ2（Tyr1217）或总 PLCγ2 HTRF 检测试剂。孵育过夜后，记录 HTRF 信号。

结果显示，抗人 IgM 抗体可诱导 PLCγ2 的 Tyr1217 位点磷酸化呈剂量依赖性增加，而蛋白表达水平未发生改变，这表明细胞表面的 B 细胞抗原受体（BCR）复合物被激活。

assay-validation-plc-gamma2-total-1（图示：总 PLCγ2 检测验证 1）

Ramos 细胞与 THP-1 细胞中的细胞密度检测

将人 B 细胞淋巴瘤 Ramos 细胞系和单核细胞 THP-1 细胞系接种到半区 96 孔培养处理板中，每孔加入 30 微升完全培养基。在 37°C、5% 二氧化碳条件下孵育 3 小时后，加入 10 微升补充后的 4 号裂解缓冲液（4 倍浓度），在室温下轻柔振荡裂解 30 分钟。检测阶段，取 16 微升细胞裂解液转移至 384 孔小体积白色微孔板，加入 4 微升磷酸化 PLCγ2（Tyr1217）或总 PLCγ2 HTRF 检测试剂。孵育过夜后，记录 HTRF 信号。

结果显示，Ramos 细胞中总 PLCγ2 的表达水平是 THP-1 细胞的两倍。

assay-validation-plc-gamma2-total-2（图示：总 PLCγ2 检测验证 2）

总 PLCγ2 HTRF 检测与蛋白质印迹法的比较

将人 B 细胞淋巴瘤 Ramos 细胞系在含完全培养基的 T175 培养瓶中，于 37°C、5% 二氧化碳条件下培养 48 小时。离心后，用 20 微克 / 毫升的抗人 IgM 抗体刺激细胞沉淀 5 分钟。随后加入 4 号裂解缓冲液（2 倍浓度），在室温下轻柔振荡裂解 30 分钟。

用补充后的裂解缓冲液对细胞裂解液进行系列稀释，取 16 微升各稀释度裂解液转移至小体积白色微孔板，再加入 4 微升总 PLCγ2 HTRF 检测试剂。取等量裂解液，通过蛋白质印迹法与 HTRF 法进行平行对比检测。

结果显示，使用总 PLCγ2 HTRF 检测时，每孔仅需 1000 个细胞即可检测到显著信号；而采用蛋白质印迹法时，需 2000 个细胞才能获得最低化学发光信号。因此，在此实验条件下，磷酸化 PLCγ2 HTRF 检测的灵敏度是蛋白质印迹法的两倍。

assay-validation-plc-gamma2-total-3（图示：总 PLCγ2 检测验证 3）

简化通路

PLCγ2 信号通路简化图

PLCγ2（磷脂酶 Cγ2）是一种胞质酪氨酸激酶，在信号转导中发挥关键作用，尤其在免疫细胞（如 B 细胞和小胶质细胞 —— 脑内常驻巨噬细胞）中。

当 B 细胞或 TREM2/DAP12 受体复合物受到刺激时，PLCγ2 会与 SYK、BTK 和 BLNK（也称为 SLP-65）相互作用，通过其催化结构域的 Tyr1217 位点磷酸化而被激活。随后，PLCγ2 会将磷脂酰肌醇 4,5 - 二磷酸（PIP2）裂解为二酰甘油（DAG）和肌醇 1,4,5 - 三磷酸（IP3）。IP3 进而会促进钙释放，并将自身降解为肌醇 1 - 磷酸（IP1）。

这一过程会触发多种信号通路的激活和细胞反应，包括细胞激活、增殖和存活。

phospho-pathway-plcgamma2-total-kit-64plcg2tpeg（图示：PLCγ2 信号通路简化图）

规格参数

其他规格参数

应用领域：细胞信号通路研究
品牌：HTRF
检测方式：HTRF
裂解缓冲液兼容性：1 号裂解缓冲液、4 号裂解缓冲液、5 号裂解缓冲液
分子修饰类型：总蛋白（Total）
产品类别：试剂盒
样本体积：16 微升
运输条件：干冰运输
靶点类别：磷酸化蛋白
靶点物种：人
技术平台：时间分辨荧光共振能量转移（TR-FRET）
治疗领域：神经科学、肿瘤学与炎症
单位规格：500 次检测

没有数据

货号：64PLCG2TPEG

一键复制

参考价格 ¥ 29723.99

产品规格

请咨询￥29723.99

参考货期：3-4周

选择数量

当前规格1件起购

加入购物车询价