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HTRF RSK1 P-T359 KIT - 10K PTS

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概述

RSK1（T359/S363 位点磷酸化）细胞检测试剂盒（Phospho-RSK1 (T359/S363) Cellular Kit）旨在通过精简的 “混合即读”（mix-and-read）免洗涤实验方案，直接对 RSK1（核糖体 S6 激酶 α-1）在苏氨酸 359（Threonine359，T359）和丝氨酸 363（Serine363，S363）位点的磷酸化水平进行稳定定量检测。RSK1 在细胞增殖与分化过程中发挥关键作用，该试剂盒应用范围广泛，既可用于基础研究，也能满足高通量药物筛选需求，适用于从基础科研到细胞模型药理学问题分析等多种场景。

工作原理

RSK1（T359 位点磷酸化）检测原理

RSK1 磷酸化检测针对 T359 位点磷酸化的 RSK1 进行定量（注：原文 “T59” 应为 “T359”，结合试剂盒名称及上下文修正）。与蛋白质印迹法（Western Blot）不同，该检测为全板基检测，无需使用凝胶、进行电泳或转膜操作。

RSK1 总蛋白检测采用两种标记抗体：一种偶联供体荧光团，另一种偶联受体荧光团。第一种抗体经筛选，可特异性结合蛋白质上的磷酸化基序；第二种抗体则能不依赖蛋白质的磷酸化状态对其进行识别。当蛋白质发生磷酸化时，会形成由两种标记抗体共同参与的免疫复合物，使供体荧光团与受体荧光团近距离接触，从而产生荧光共振能量转移（FRET）信号。该信号强度与样本中磷酸化蛋白质的浓度直接成正比，为 “免洗涤” 检测模式下评估蛋白质磷酸化状态提供了有效手段。

rsk1-phospho-t359-s363-assay-principle（图示：RSK1（T359/S363 位点磷酸化）检测原理）

RSK1（T359 位点磷酸化）双板检测方案

双板检测方案的流程为：先在 96 孔板中培养细胞，随后进行细胞裂解；将裂解液转移至 384 孔小体积检测板后，加入 RSK1（T359 位点磷酸化）均相时间分辨荧光（HTRF）检测试剂。该方案可实现对细胞活力及汇合度的监测。

rsk1-phospho-t359-s363-assay-protocol-01（图示：RSK1（T359/S363 位点磷酸化）双板检测方案）

RSK1（T359 位点磷酸化）单板检测方案

使用 HTRF 试剂检测 RSK1（T359 位点磷酸化）可在单个培养板中完成，该培养板同时用于细胞培养、刺激及裂解，无需洗涤步骤。此方案专为高通量筛选（HTS）设计，可在实现实验微型化的同时，保持稳定可靠的 HTRF 检测质量。

phospho-how-it-works-rsk1-phospho-t359-s363-assay-protocol-02（图示：RSK1（T359/S363 位点磷酸化）单板检测方案）

检测验证

表皮生长因子（EGF）刺激的 A431 细胞中 RSK1 总蛋白与 T359 位点磷酸化 RSK1 的检测

将 A431 细胞（人表皮癌细胞系）以每孔 80,000 个细胞的密度，用 100 微升（µL）完全培养基接种到 96 孔板中，在 37°C、5% 二氧化碳（CO₂）条件下孵育过夜。次日，加入 50 微升浓度递增的 EGF，在 37°C、5% 二氧化碳条件下处理 5 分钟。

移除培养基后，加入 100 微升补充后的 2 号裂解缓冲液，在室温（RT）下轻柔振荡裂解 30 分钟；取 16 微升裂解液转移至小体积白色微孔板，随后加入 2 微升 HTRF D2 检测试剂和 2 微升 HTRF Eu-K 检测试剂。RSK1 总蛋白与 T359 位点磷酸化 RSK1 的检测在独立孔中进行，孵育过夜（ON）后记录 HTRF 信号。

assay-validation-rsk1-phospho-t359-s363（图示：RSK1（T359/S363 位点磷酸化）检测验证结果）

简化通路

RSK1 的功能与调控机制

核糖体 S6 激酶 α-1（RSK1）是丝氨酸 / 苏氨酸激酶，属于 MAP 激酶（促分裂原活化蛋白激酶）与 ERK（细胞外信号调节激酶）信号通路的下游组件，参与转录因子调控、细胞增殖、存活及分化过程。

RSK1 的激活过程分为两步：首先，MAPK1/ERK 激酶磷酸化其 Thr359/Ser363 位点，实现初始激活；随后，RSK1 在 Ser380 位点发生自身磷酸化，为 PDK1（磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 1）的结合创造条件，从而完成完全激活。

pathway-rsk1-phospho-t359-s363-64rsk1t9peg（图示：RSK1（T359/S363 位点磷酸化）相关简化通路）

规格参数

其他规格参数

应用领域：细胞信号传导
自动化兼容性：是（Yes）
品牌：HTRF
检测方式：HTRF（均相时间分辨荧光）
裂解缓冲液兼容性：1 号裂解缓冲液、2 号裂解缓冲液
分子修饰类型：磷酸化
产品类别：试剂盒（Kit）
样本体积：16 微升（µL）
运输条件：干冰运输
靶标类别：磷酸化蛋白质
靶标物种：人（Human）、小鼠（Mouse）
技术平台：TR-FRET（时间分辨荧光共振能量转移）
治疗领域：感染性疾病、代谢 / 糖尿病、肿瘤学与炎症、罕见病
单位规格：10000 个检测点（10,000 assay points）

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货号：64RSK1T9PEH

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